摘要：为了研究特异小干扰RNA(siRNA)作用于大肠癌细胞株SW 480中plk1(Polo-like k inase 1)基因表达的mRNA对该细胞分裂生长的影响,设计了对应于plk1基因表达mRNA不同位点的10种特异siRNA,经化学合成后,用脂质体转染SW 480细胞,实时定量PCR检测plk1基因的表达,观察不同的siRNA作用强度,并计数细胞了解相应细胞的生长情况,W estern-b lot观察plk1表达蛋白的变化和流式细胞计数分析细胞周期改变。发现10种siRNA均可敲除plk1基因表达的20%以上,其中P1、P4和P9 3组敲除mRNA达80%以上,这3种siRNA及其混合物对plk1基因mRNA的作用具有相应浓度效应,在25 nmol/L时达到最佳作用效果,而且相同浓度的混合物作用效果更好(超过95%),plk1表达蛋白质明显降低,细胞周期在G2期受到阻碍。72 h后的各种siRNA浓度下细胞生长变化与plk1基因的mRNA水平变化相一致。结果表明化学合成的特异siRNA对SW 480细胞中plk1基因表达具有消除作用,混合物作用更强,在细胞水平上抑制了SW 480细胞的分裂生长。

摘要：目的:研究慢病毒介导的plk1(Polo-like kinase1)基因RNAi对食管鳞癌细胞侵袭转移的影响.方法:利用RT-PCR和Western blot检测不同食管鳞癌细胞中plk1的表达.根据人plk1mRNA序列设计干扰片段,Western blot检测干扰效率;利用划痕愈合实验及Transwell实验研究靶向plk1的RNAi对食管鳞癌细胞体外侵袭转移能力的影响.将有效干扰序列构建至慢病毒干扰载体pGLV/H1/GFP+Puro中,测序鉴定.重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞包装病毒,制备的重组病毒感染食管鳞癌细胞,利用荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率;利用裸鼠肺转移模型实验研究慢病毒介导的plk1基因RNAi对食管鳞癌细胞在体内侵袭转移能力的影响.结果:筛选出一种高表达plk1的食管鳞癌细胞株TE-8用于实验研究;筛选出有效的干扰片段,并成功构建靶向干扰plk1基因的慢病毒载体,制备重组病毒颗粒用于感染食管鳞癌细胞;靶向plk1的RNAi在体内外均能明显抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移.结论:靶向干扰plk1基因的重组慢病毒能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭与转移,plk1基因影响着食管鳞癌的恶性进展.

摘要：目的:以plk1基因为靶筛选抗肿瘤药物。方法:根据plk1mRNA的二级结构设计8条反义寡核苷酸药物,以脂质体介导进行转染,MTT染色计算细胞生长抑制率,从中筛选出一条序列并对其进行优化。最后以最佳序列9号进行体外作用持续时间及裸鼠移植瘤细胞生长抑制率分析。结果:针对5'编码区的5号序列在0.2μmol/L、0.4μmol/L和0.8μmol/L时抑制率分别是59.1%、75.5%和90.7%。它抑制细胞增殖作用最强。5号序列的5'端向内移动3个碱基形成的9号序列的抑制率高于其它3条序列,9号的IC50是0.081μmol/L。终浓度为0.2μmol/L的9号药物经脂质体介导转染给药1次后,抑制活性逐渐增加,第4天抑制率达到93.0%的峰值,然后缓慢下降,到第6天抑制率为78.3%。荷瘤裸鼠每日腹腔注射9号药物(25mg/kg)用药28天,处死时对照组的瘤重为(1.536&#177;0.196)g,用药组瘤重为(0.485&#177;0.378)g,方差分析表明用药组与对照组相比有显著性差异(t=5.59P<0.01),用药组抑瘤率达68.42%。结论:靶向plk1的反义治疗能够抑制肿瘤的生长,对正常细胞无明显毒性。plk1可作为肿瘤治疗的新靶点。

摘要：目的设计合成一类新型plk1抑制剂,并测试其对plk1激酶的抑制活性,探讨初步构效关系,为后续相关研究提供参考。方法以化合物HBST145为基础,通过生物电子等排等方法,设计、合成新型plk1抑制剂,分别采用均相时间分辨荧光法和CCK-8法测定化合物对plk1激酶的抑制活性以及抗肿瘤细胞增殖活性。结果与结论共合成了10个新化合物,其结构均经ESI-MS和^(1)H-NMR确证。抑酶活性结果表明化合物5a~5d、5j对plk1抑制活性的IC_(50)值分别为2.58、3.09、7.08、3.61、8.99 nmol&#183;L^(-1),活性优于化合物HBST145。目标化合物5a~5j对HL-60和THP-1细胞的抗增殖活性均明显提高,其中化合物5d的抗细胞增殖活性较好,可作为优选化合物进行深入研究。

摘要：目的设计、合成一系列4-氨基嘧啶苯磺酰胺类化合物,评价化合物对plk1(polo-like kinase 1)的抑制活性。方法以4,6-二氯嘧啶和取代硼酸酯为原料,经Suzuki偶联、氨解反应制备目标化合物Ⅴ1~Ⅴ15;测试目标化合物的体外plk1抑制活性。结果与结论共合成15个未见文献报道的新化合物,其结构经MS和1H-NMR谱确证。体外抑酶活性试验结果表明,目标化合物对plk1抑制活性均较先导化合物减弱,其中化合物Ⅴ10对plk1抑制活性相对较好(IC50=2.937μmol&#183;L^(-1))。

摘要：目的构建保罗样激酶-1（plk1）基因小干扰RNA（siRNA），并观察其对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成5个plk1siRNA（S1、S2、S3、S4、S5），转染人甲状腺癌ARO细胞后，采用实时定量RT—PCR方法筛选下凋plk1mRNA效果最好的siRNA；然后以该siRNA转染ARO细胞后，分别以实时定量RT—PCR和Western blot检测各组细胞plk1基因表达情况；以MTT法检测对各组细胞增殖的影响；分别以caspase-3活性和TUNEL方法明确甲状腺癌细胞凋亡情况。结果5个siRNA均明显下调plk1mRNA水平，以S4效果最好，抑制率达91．5％。MTT结果显示，S4siRNA转染对甲状腺癌细胞增殖均有明显的抑制作用，且呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）。与对照组比较，S4siRNA转染组癌细胞caspase-3活性明显升高，且呈浓度和时间依赖性（r=0．919；r=0．957）；TUNEL结果显示，S4 siRNA转染组出现明显的凋亡现象，且呈浓度依赖性（r=0．932）。结论plk1基因在甲状腺未分化癌细胞增殖中具有重要的调控作用。plk1 siRNA转染可明显抑制癌细胞增殖，诱导凋亡是其重要机制之一。

摘要：目的探讨RNAi沉默plk1基因表达与胰腺癌细胞侵袭转移能力的关系。方法根据plk1基因特点,设计并用化学方法合成了4个小干扰核糖核酸分子(siRNA)(shplk1-1、shplk1-2、shplk1-3、shplk1-4),脂质体转染法将短链siRNA转入AsPC-1细胞;细胞分为:未处理组为对照组、空质粒组、shplk1-1组、shplk1-2组、shplk1-3组、shplk1-4组。采用RT-PCR和Western blot法检测siRNA对plk1表达的抑制效果;采用Transwell法检测转染后细胞侵袭能力;采用划痕实验检测转然后细胞迁移能力。结果 RT-PCR和Western blot结果示所设计的4个siRNA均能明显抑制AsPC-1细胞plk1 mRNA水平,以shplk1-3效果最好,与对照组、空质粒组及其他三组比较,转染shplk1-3组plk1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P<0.01);以转染shplk1-3处理AsPC-1细胞后与对照组、空质粒组比较,Transwell侵袭实验证实:细胞转染24 h后,正常对照组、空质粒组和shplk1-3组穿过人工基底膜的侵袭细胞数分别为(195&#177;16)、(176&#177;13)、(83&#177;5)个,侵袭能力明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01);细胞划痕实验证实:shplk1-3组迁移能力明显降低。结论抑制胰腺癌细胞plk1基因,侵袭迁移能力明显降低,能够为胰腺癌的治疗提供新的策略。

摘要：目的:构建GFP-plk1同义突变表达载体及其稳定转染细胞系。方法:设计Polo样激酶1(plk1)si RNA序列及相对应的同义突变引物,并利用二次PCR方法扩增plk1基因,定向克隆到p Rex-EGFP-IRES-Hygro载体中,构建p Rex-EGFP-r plk1-IRES-Hygro表达载体;利用逆转录病毒感染的方法,构建He La/GFP-r plk1稳定细胞系;利用免疫印迹及激光共聚焦显微镜,验证plk1 si RNA的干扰效果及稳定细胞系的构建。结果:双酶切鉴定和测序结果表明构建的p Rex-EGFP-r plk1-IRES-Hygro正确;免疫印迹实验证明plk1 si RNA序列可以有效抑制He La/GFP-r plk1细胞中内源性plk1蛋白的表达,但不能干扰掉外源GFP-r plk1蛋白;在荧光共聚焦显微镜下,观察到有丝分裂的前中期和末期,GFP-r plk1分别定位于着丝粒和中间体上。结论:构建了plk1同义突变表达载体p Rex-EGFP-r plk1-IRES-Hygro和He La/GFP-r plk1稳定细胞系,为下一步研究plk1在有丝分裂期的调控机制提供了模型。

摘要：目的:探讨Polo样激酶1(plk1)在结肠直肠癌组织中的表达及体外RNA干扰抑制plk1对结肠直肠癌细胞增殖的影响。方法:应用免疫组化法测56例结肠直肠癌病人的癌组织和癌旁正常组织中plk1及PCNA的表达;用Western印迹法测肠癌主要细胞株中plk1的表达;针对plk1基因设计3条小干扰RNA片段,瞬时转染高表达结肠直肠癌细胞株,采用实时定量PCR及Western印迹法测转染后plk1的基因及蛋白的表达水平;CCK-8法测细胞增殖能力。结果:结肠直肠癌组织中plk1、PCNA的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05),两者的表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和浸润深度均有相关性(P<0.05),且两者间的表达呈正相关(P<0.05)。Western印迹法筛选出SW1116细胞株plk1表达最高,下调plk1表达后,其增殖能力较对照组都有所下降(P<0.05)。结论:plk1在结肠直肠癌组织中呈过表达,可能在结肠直肠癌细胞增殖调节失衡中起重要作用,并进一步促进其迁移和浸润,其有望成为评估结肠直肠癌进展及预后的一个重要指标。