摘要：参照GenBank中相关的基因序列,设计了6对引物分别用于扩增prv gE、PPV NS1、PCV ORF2、PRRSV ORF7、CSFVE2、JEVE基因的部分片段。敏感性和特异性试验结果表明,该mPCR对6种病毒的最低核酸检测量分别为prv 6.6pg、PPV 96pg、PCV 12.9pg、PRRSV 10.5pg、CSFV 51pg、JEV 46pg,对猪流感病毒(SIV)、大肠杆菌(***)的扩增结果均为阴性。103份临床病料检测结果表明,上述6种猪病毒性疫病在贵州省猪群中普遍存在且混合感染情况严重。该六重PCR方法不仅实现了上述6种病毒的同时检测,更实现了DNA病毒及RNA病毒的同步检测,能够对prv、PPV、PCV、PRRSV、CSFV、JEV单个或混合感染的临床病料进行快速鉴别诊断。

摘要：参考GenBank中登录的猪细小病毒(PPV)(M38367.1)基因序列,设计1对可以扩增出约1.6kb PPV VP2基因片段的特异性引物,上、下游引物的5′端均引入BamHⅠ酶切位点,PCR扩增得到VP2目的片段后,连接到pMD18-T载体中得到重组质粒pMD-VP2。取本实验室构建的含绿色荧光蛋白标记基因的伪狂犬病毒(prv)通用转移质粒pG和构建好的pMD-VP2质粒,用BamHⅠ对质粒pG和pMD-VP2进行酶切,然后用CIAP对酶切产物进行去磷酸化处理,纯化回收后将VP2基因插入pG质粒中获得重组伪狂犬病毒转移质粒pGVP2。用脂质体转染法将prv HB-98株全基因组与质粒pGVP2共转染ST细胞,得到携带有PPV VP2外源抗原基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组伪狂犬病毒rprv-VP2株。结合VP2基因PCR扩增和绿色荧光观察,经5轮病毒空斑纯化得到了纯化的重组病毒rprv-VP2株。

摘要：根据GenBank上已发表的猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)的VP2基因序列和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,prv)的gH基因序列,设计合成了两对特异引物,分别建立了PPV和prv的单项PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了PPV和prv的复合PCR诊断方法,即利用一次PCR反应,可同时扩增PPV的751bp和prv355bp的特异性片段,而扩增猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)及相应的培养细胞(PK-15)核酸结果均为阴性,对PPV和prv的最低检出量分别为100pg和10pg的DNA。该方法适合对PPV和prv的联合检测和鉴别诊断。

摘要：根据GenBank中公布的猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,prv)UL区基因序列(KJ789182)设计2对特异性引物,扩增prv NY株TK基因两侧序列,克隆至pUC-19载体,然后绿色荧光蛋白标记基因,构建转移质粒pUCTKLRE。用转移质粒pUC-TKLRE和prv双基因缺失突变株rprv NY-gE-/gI-DNA共转染ST细胞,通过蚀斑纯化,获得表达荧光蛋白的prv三基因缺失突变株rprv NY-gE-/gI-/TK--EGFP+。经PCR鉴定及测序,证实获得的三基因缺失株rprv NY-gE-/gI-/TK--EGFP+在TK基因上缺失了311bp。该病毒与亲本株prv NY在ST细胞上培养时,具有相似的生长曲线,但其体外生长动力学比亲本株弱;且对非靶标动物小鼠是安全的。结果表明,本试验釆用同源重组,同时结合蚀斑克隆纯化技术,成功构建了1株以目前prv流行变异株为亲本株的gE/gI/TK三基因缺失病毒,为防控当前prv变异毒株的疫情、根除PR提供技术支持。

摘要：通过对GenBank发布的猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(prv)和猪圆环病毒2型(PCV2)的核苷酸序列进行比对分析,找出PPV的VP2基因,prv的gH基因和PCV2的ORF2基因的相对保守区域。利用生物学软件在保守序列分别设计高溶解温度引物,将常规三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,通过对PCR反应条件的优化,确定最佳引物浓度、最佳聚合酶浓度、最佳退火温度以及最佳反应体积,建立了多重二温式PCR方法检测PPV、prv和PCV2,其扩增的目的片断大小分别为PPV(142 bp)、prv(300 bp)和PCV2(469 bp),从而节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对PPV、prv和PCV2 3种猪主要DNA病毒进行检测。用30份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为95%以上。表明建立的多重PCR检测方法,具有高度特异、快速、敏感等特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。

摘要：参考GenBank中发表prvOSU毒株VP6序列ORF两端保守区，设计1对特异引物，以prvJS株反转录cDNA为模板，通过PCR方法获得约1．3kb的基因片段，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明：获得了VP6的1320bp全基因序列；将其ORF与国内外9株prvVP6基因的ORF进行核苷酸和氨基酸同源性比较，核苷酸同源性在77．1％～91．1％之间，氨基酸的同源性在89．7％～99．5％之间；在氨基酸系统发育进化树中，JS毒株与A131、OSU、CN86毒株亲缘关系较近．为一个进化群。

摘要：根据GenBank中PRRSV ORF6、PCV2 ORF2、PPV NS1、prv gB、SIV M、JEV NS1、CSFV E2等基因的部分片段,分别设计特异性引物,用实验室已保存的病毒及阳性病料,通过对7个病毒单一PCR的退火温度和敏感性进行优化和检测,再选择合适的多重PCR缓冲体系及酶,优化退火温度、模板及引物浓度,最后检测多重PCR的敏感性、特异性及重复性,建立一种能够同时且快速鉴别PRRSV、PCV2、PPV、prv、SIV、JEV和CSFV这7种常见猪呼吸道和繁殖障碍类病毒的多重PCR检测方法,并用其对2017-2019年贵州部分地区的150份临床病料进行检测。多重PCR特异性检测结果表明:从混合病毒基因组中分别扩增出大小为224,353,424,549,684,831,1 137 bp的特异性片段,未扩增出***、APP、PEDV及正常组织的DNA/RNA;敏感性试验表明,该方法对病毒的最低检测量分别为PRRSV 94 pg、PCV2 66 pg、PPV 68 pg、prv 20 pg、SIV 35 pg、JEV 17 pg、CSFV 14 pg;重复性试验表明:相同条件下的6次重复试验均能扩增出7个病毒的目的条带;应用试验表明:150份临床病料中二重感染阳性率高达66.00%(99/150);三重感染阳性率达11.33%(17/150);四重感染阳性率达2.00%(3/150);五重感染阳性率达0.67%(1/150);六重感染阳性率为0,七重感染阳性率为0,阳性PRRSV、PCV2、PPV、JEV、SIV的多重PCR与单一PCR的符合率均为100.00%,阳性CSFV和prv的符合率为90.00%以上,研究建立的多重PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,对猪场猪呼吸和繁殖障碍类病毒病混合感染的快速诊断具有十分重要的意义。

摘要：根据Genbank上已发表的猪伪狂犬病毒(prv)、猪细小病毒(PPV)和猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因序列,用ArrayDesigner2.0软件设计并合成了prvgB、PPVVP2、JEVC基因片段的3对引物,以prvFa株、PPVB2株、JEVSA14-14-2株细胞培养物提取核酸人为混合后作为模板,筛选PCR反应条件,扩增出长度分别为324bp、471bp和238bp的3条特异性片段,建立了检测3种病毒的多重PCR方法。应用该方法对prvFa、prv渝A、8F20、BUK株、德国Bartha-K61株、prvEa株、prv疫苗毒,PPVB2株、PPVSR标准株SR-1、SR-2、SR-3,JEVSA14-14-2株的病毒核酸进行扩增,均获得了特异性的目的片段,而扩增PRRSV、CFSV、PCV-2及相应的培养细胞核酸结果均为阴性。对prvFa、PPVB2和JEVSA14-14-2的最低检出量分别为17.5pg、13.7pg和20pg的DNA或cDNA。该试验方法适合对prv、PPV和JEV的联合检测和鉴别诊断。

摘要：随着科技的发展,从飞机系统的自检测试到飞机部件的功能测试,自动化测试技术在民航维修业中的应用变得越来越广泛。并且国外的OEM和国内的MRO还在积极的开发和升级各类型自动测试软件,以占领相应的技术高地和赢得更多的维修市场。本文中的HPV和prv活门是A320飞机引气系统中故障频发的两个部件,适合用软件进行自动测试和故障诊断。因此根据对应CMM中的测试要求和排故方案,并结合自动化测试技术,设计出了针对该类活门通用的自动测试和故障诊断系统软件,该系统具有测试准确和效率高等特点。

摘要：文章根据prv基因序列,设计特异性引物扩增g H基因,构建重组质粒;优化实验条件,建立prv SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果表明该方法的标准曲线线性关系良好,R2=0.998,E=103.854%;特异性强,检测猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环2型病毒、猪乙脑病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗等均无扩增曲线;灵敏度高,最低可检测到的27.9拷贝;在公猪精液中最低可检测到病毒量为16TCID_(50)/100μL,可重复验证,变异系数均低于3.5%;利用该方法对湖南省109份公猪精液样品进行了检测,发现20份阳性样品,阳性率为18.35%,比国标普通PCR法检出率高。该方法的建立将为prv的流行病学调查提供可靠的技术支持。