摘要：目的中晚期宫颈癌患者因缺乏有效的治疗靶点而疗效较差,需从更深入的研究宫颈癌发病机制中寻找治疗靶点。有研究发现长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1(plasmacytoma variant translocation 1,pvt1)在胃癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中高表达并参与肿瘤进程,起着类似癌基因的作用。本研究拟检测LncRNA pvt1在宫颈癌组织及细胞系中的表达,并观察其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法选取2015-08-30-2017-04-30在淄博市中心医院行手术切除的30例宫颈癌及相应癌旁新鲜组织(距癌组织>2cm)。采用RT-PCR检测癌及癌旁组织pvt1表达,并同时检测宫颈癌HeLa及SiHa细胞系中pvt1表达;参考pvt1基因序列设计2个pvt1 siRNA序列:si-pvt1-1、si-pvt1-2,及无关序列对照siRNA(NC-siRNA)。利用Lipofectamine 2000转染试剂盒将si-pvt1-1、si-pvt1-2、NC-siRNA序列分别转染宫颈癌HeLa及SiHa细胞株。分别采用CCK-8实验及集落形成实验检测下调pvt1表达后宫颈癌HeLa及SiHa细胞的增殖能力变化;Transwell小室检测迁移和侵袭能力。结果 pvt1在30例宫颈癌组织和HeLa及SiHa细胞系中表达上调。与癌旁组织(0.062&#177;0.015)相比,宫颈癌组织中pvt1(0.115&#177;0.031)的表达上调,差异有统计学意义,t=3.92,P<0.05。HeLa和SiHa细胞中pvt1的相对表达量高于正常宫颈Ect1/E6E7细胞。转染pvt1siRNA后,宫颈癌HeLa及SiHa细胞的pvt1表达被抑制。CCK-8法显示与转染NC-siRNA序列组比较,宫颈癌细胞HeLa及SiHa转染pvt1 siRNA后增殖能力降低,F=112.608,P<0.001。转染si-pvt1-1(44.23&#177;0.52)和NC-siRNA序列(115.38&#177;1.21)的宫颈癌HeLa细胞集落形成数差异有统计学意义,F=126.328,P<0.001;转染si-pvt1-1(48.03&#177;0.65)和NC-siRNA序列(121.15&#177;1.51)的宫颈癌SiHa细胞集落形成数差异有统计学意义,F=118.245,P<0.001。Transwell检测结果示,和NC-siRNA组相比较si-pvt1-1组HeLa细胞迁移能力降低为0.50&#177;0.03,侵袭能力降低为0.55&#177;0.08,F=29.412,P<0.001;而si-pvt1-1组SiHa细胞迁移能力、侵袭能力分别降低至0.57&#177;0.06和0.50&#177;0.06,F=31.326,P<0.001。提示siRNA下调pvt1表达后HeLa及SiHa细胞株增殖、迁移和侵袭能力均降低。结论 pvt1在宫颈癌发挥类似癌基因作用,这可能为宫颈癌提供新的治疗靶点。

摘要：目的筛选靶向抑制长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤转化迁移基因1(pvt1)的小干扰RNA(siRNA),并探讨其对人白血病细胞株K562细胞增殖的影响。方法针对pvt1设计合成pvt1-siRNA1、2、3、4序列及无关对照siRNA(SC-siRNA)序列。利用Hiper Fect转染试剂将各条siRNA转入K562细胞,实验依此分为siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组、siRNA4组和SC-siRNA组,并设空转组和细胞组。转染后用实时定量RTPCR检测细胞中pvt1 RNA的相对表达情况,用CCK8法检测细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞周期。结果转染24、48 h后siRNA4组pvt1 RNA水平下降,与SC-siRNA组、空转组和细胞组相比差异有统计学意义(P0.05);转染24、48、72 h后siRNA4组细胞增殖抑制率都增加,与SC-siRNA组和空转组相比差异均有统计学意义(P<0.01);转染48、72 h后siRNA4组出现了G1期阻滞,G1期细胞比例增加,与SC-siRNA组、空转组和细胞组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 pvt1-siRNA可通过阻滞细胞周期的进展而抑制K562细胞的增殖。