摘要：在克隆猪prox1基因(sprox1)的基础上,对猪prox1基因进行染色体定位分析,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物进行亚细胞水平定位。本研究将人和鼠的prox1基因编码区在猪的ESTs数据库中进行检索,然后根据EST进行序列拼接并设计引物对猪prox1基因编码区进行克隆。通过比对人、鼠及其他物种prox1基因第二个内含子序列,设计引物扩增猪prox1基因部分内含子,根据克隆得到的部分内含子序列设计引物,利用猪-仓鼠体细胞辐射杂种板(IMpRH)对猪prox1基因进行染色体定位。根据已获得的猪prox1基因编码区序列,构建猪prox1基因的融合绿色荧光超表达载体EGFP-prox1,并转染猪肾PK15细胞,12h后倒置荧光显微镜观察prox1蛋白在亚细胞内的定位。结果表明:prox1基因定位于猪第9号染色体长臂的26区,与标记SW1651紧密连锁;构建猪prox1基因的真核表达载体pEGFP-N1-prox1,融合蛋白EGFP-prox1定位于PK15细胞的细胞核中。

摘要：为克隆鸡prox1基因CDS区序列并进行生物信息学分析,根据GenBank已发表的鸡prox1基因序列设计合成引物,以鸡眼睛提取的总RNA反转录产物为模板,通过PCR扩增prox1基因CDS区,利用生物信息学软件,对其理化性质、蛋白结构和系统进化树进行分析。结果从鸡眼睛中成功扩增出鸡prox1基因CDS区。测序结果显示,鸡prox1基因CDS区全长2 211 bp,共编码736个氨基酸,理论pI 6.62,相对分子质量约为82.86 ku,分子式为C3601H5671N(1049O1136S32。序列分析表明,鸡prox1蛋白二级结构主要是由无规则卷曲(占53.67%)和α螺旋组成(占39.40%);鸡prox1蛋白主要定位在细胞核,与其互作的细胞蛋白主要有LYVE1、PAX6、KDR、VEGFC和FLT4。核苷酸同源性及遗传进化分析发现:鸡与鹌鹑prox1基因核苷酸同源性最高(为97.8%),并且与鹌鹑的亲缘关系最近。研究结果为进一步研究鸡prox1蛋白调控鸡眼睛发育的机理奠定了基础。