摘要：【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)quaking基因敲除细胞株,并检测quaking基因对NIH3T3细胞增殖能力的影响。【方法】首先,利用在线网站设计两条靶向作用于quaking外显子的sgRNA,成功构建了两个分别靶向quaking基因第1、第2外显子的CRISPR/Cas9重组慢病毒质粒。将构建的quaking基因CRISPR/Cas9重组慢病毒载体和pcDNA3.1-quaking过表达质粒共转染至HEK293T细胞中,通过Western blot实验检测quaking蛋白的敲除效率。其次,将筛选得到的敲除效率高的重组慢病毒质粒(LentiCRISPRv2-sgRNA1)与辅助包装质粒共转染入HEK293T细胞进行慢病毒包装,慢病毒转导NIH3T3细胞后,利用嘌呤霉素筛选阳性单克隆细胞株。最后,通过Western blot及免疫荧光染色鉴定敲除效果。【结果】发现quaking蛋白在该细胞株中不表达,并测序证实了发生片段敲除。CCK8检测发现,quaking基因敲除显著抑制了NIH3T3细胞的增殖能力。【结论】本研究首次通过CRISPR/Cas9技术成功构建了小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)quaking基因敲除细胞株,为后续研究quaking基因在小鼠生理功能调节中的作用机制提供了体外模型基础。