摘要：目的对重庆地区22例rhd变异型无偿献血者标本进行Rh血型血清学检测和三代基因测序,了解重庆地区rhd变异型的表型分布及其基因分型。方法选择2023年1—8月本中心参与无偿献血的人群作为研究对象。使用传统血清学方法对其进行rhd表型鉴定,确定为rhd变异型后使用D-screen试剂盒对其进行rhd不同抗原表位的检测。此外,提取其基因组DNA,使用叠瓦式引物设计进行多段扩增、拼接获得rhd基因全长序列进行三代测序检测,并用SnapGene软件对序列结果进行分析。结果在22例rhd变异型中,8例为DVI 3型(36.36%),其存在rhd-CE(3-6)-D杂交等位基因;6例部分弱D15型(27.27%),主要发生的突变为c.845G>A;6例亚洲型Del(27.27%),主要发生的突变为c.1227G>A,还有1例弱D17型发生的突变为c.340C>T和1例推测为部分D(c.491A>T,***164Val,错义突变)。结论重庆地区无偿献血人群中最常见的rhd变异型为DVI 3型,使用SMRT三代测序技术可以获得rhd变异型单倍体全长。

摘要：目的 调查贵州黔东南地区侗族人群rhd基因组合情况,了解rhd基因遗传特点.方法 根据中国人Rh分子特点和rhd基因缺失原理设计2对引物,对301名侗族无血缘关系的血样分别检测rhd基因第1外显子和融合盒子,再引入1对内对照引物以确保结果的可靠性.结果 292例rhd阳性样本中58例（19.86%）为rhd＋/rhd-型,234例（80.14%）为rhd＋/rhd＋型.9例血清学初筛rhd阴性样本中：5例rhd＋/rhd-型（2例弱D,3例Del型）;3例rhd＋/rhd＋型（1例弱D,2例DeD;1例rhd-/rhd-（1例D阴性）.结论 本组rhd阳性人群中存在的rhd＋/rhd-杂合型高于其它地区的报道,9例血清学初筛D阴性的人群中存在rhd基因单倍体比例也较高.

摘要：目的　探讨采用简易的分子生物学方法检测rhd基因纯合子和杂合子的有效性。方法　按美国基因序列数据库中的rhd盒子序列设计两对引物 ,分别检测rhd基因下游盒子和融合盒子 ,并引入一对内对照引物 ,建立双管聚合酶链反应 (PCR)技术用于检测rhd基因合子型。同时以经典的限制性片段长度多态性 (RFLP)方法作对照。共检测 30份Rh血型D抗原 (rhd)阳性、阴性及弱D表型个体的全血DNA样品。结果　 30份血DNA样品中 ,2 9份样品双管PCR法和RFLP法检测结果完全一致 ,并分别与样品的血清学血型相吻合 ;对其中的 1例弱D表型血DNA样品 ,PCR和RFLP法均鉴定为rhd阴性纯合型 (rhd- rhd- ) ,显示该个体拥有一条rhd- 单倍体 ,但rhd下游盒子检测出现假阴性。结论　双管PCR法是简易而有效的基因检测方法 ,可用于rhd合子型鉴定 ,在临床上可以预测胎儿的rhd血型。

摘要：目的 :研究rhd基因结构 ,重点检测启动子区 ,探究rhd基因的表达机制 .方法 :采用PCR SSP方法 ,设计 3对序列特异性引物 ,对 6 0例无血源关系rhd(+)汉族人样本、98例无血源关系rhd(- )汉族人样本和 2例弱D型汉族人样本rhd基因启动子区约 10 0 0bp范围内的 4个rhd基因特异性多态性位点进行检测 .结果 :rhd表型 (- ) /rhd基因型 (- )个体启动子区全缺失 ,表型rhd阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体启动子区都不缺失 .结论 :rhd表型 (- ) /rhd基因型 (- )个体符合rhd阴性的普遍机制 ,表型rhd阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体存在另一种rhd阴性机制 .

摘要：目的了解恩施州土家族人群rhd阴性个体的表型分布及基因合子型特点。方法根据中国人Rh分子特点和rhd基因缺失原理设计2对引物,对从56 159(人)份土家族人群中筛查出无血缘关系的Rh阴性个体,检测其rhd基因第1外显子和融合合子型。结果血型血清学检测恩施州土家族人群的rhd阴性比例为1.5‰(85/56 159);PCR-SSP法鉴定出其中63.53%(54/85)为rhd-/rhd-,32.94%(28/85)为rhd+/rhd-型,3.53%(3/85)为rhd+/rhd+型。结论恩施州土家族rhd阴性人群的rhd基因合子型中的rhd+/rhd-杂合型比例高于浙江汉族rhd阴性人群(25.48%)及中国哈萨克族rhd阴性人群(16.67%)的相应比例。

摘要：rhd基因下游包括3'-端非编码区、下游Rh盒子和SMP1基因等,3'-端非编码区的具体序列目前尚不清 楚。本研究目的旨在测定3'非编码区序列。根据最近的文献报道和EMBL／GenBank／DDBJ记录的基因序列,设计 1对引物,建立聚合酶链式反应(PCR)方法,特异性扩增10名Rh阳性表型和10名D放散型(Del)表型个体的 DNA样品的rhd基因3'-端非编码区全长序列,PCR产物纯化后进行直接测序。结果表明:10份Rh阳性和10份 DelDNA样品的测定结果完全一样,显示rhd基因终止密码子与rhd基因的下游Rh盒子首位碱基之间相距103 bp,无重复序列等特殊片段;D放散型等位基因的3'-非编码区与正常Rh阳性个体一致。结论:D放散型D抗原减 弱与3'-非编码区无关。

摘要：目的　建立特异性针对中国人的rhd基因定型方法。方法　设计6对特异性针对中国人rhd等位基 因的引物,并引入1对内对照引物,建立PCR 序列特异性引物(PCR- SSP)方法,分6个反应管检测rhd基因。采 用这一方法检测经血清学鉴定和rhd全基因序列分析的88份中国汉族人Rh阴性样本,13份Rh阳性、弱D型和 部分D表型样本,以及28份D放散型(Del)样本,同时对318名随机无偿献血者作rhd基因定型,然后与血清学检 测结果比较。结果　所有样本的PCR SSP检测结果均与血清学结果一致(符合率100%),并可指示目前在中国人 中观察到的全部rhd基因阳性、D抗原阴性等位基因(或称无效等位基因),同时还可检出Del表型及存在于Rh阳 性个体中的Del等位基因(rhd1227A)即rhd/Del杂合型(或rhd/rhd1227A);对318名随机个体的rhd 基因检测显示后者在中国人群中的比例为8/318,Del基因在中国人群中频率即为0.012579。结论　上述PCR-SSP 方法简便、快速,且具有较高的准确率,可用于临床或科研进行中国人rhd基因定型或遗传分析。

摘要：rhd抗原(ISBT004.001；RH1)是一种由rhd蛋白携带的非常重要的血型抗原，是引起新生儿溶血病的最主要原因［1］。极少数人红细胞的D抗原表达数目减少，被称之为弱D(以前叫作DＵ)，在白种人中的比例为0.2%～1%，在黄种人中的比例则更低。一部分弱D被解释为rhd蛋白的质的变化，称之为部分D，通常是由rhd／RHCE杂化基因引起，另一部分弱D是由Cde单倍体反式位置的抑制作用引起，这些弱D可能有正常的rhd基因，其rhd抗原表达只是微量减少，被宽松地称之为高级DＵ，现在常被定为正常的rhd。最近笔者发现1名供血者红细胞为弱D型，且实验结果显示弱D型具有独特的基因结构，现报告如下。1 对象与方法1.1 研究对象献血者，男，21岁，汉族，在校学生，来本中心献血时被确定为弱D；阴阳性对照血样亦均取自本中心献血者，民族为汉族。1.2 序列特异性引物针对rhd和RHCE基因之间最具差异的区段设计多对不同引物，特异性地扩增rhd基因的第2～7，9，10外显子和RHCE基因的第1，2，4，5外显子，以及rhd和RHCE基因的第4内含子(表1)。另以人类生长激素(HGH)基因序列特异性引物作为内对照引物，扩增片段为429bp(以上引物均由美国G&T公司合成、纯化及鉴定)。1.3 基因组DNA的制备使用美国G&T公司基因组DNA抽提试剂盒，采用盐析法从供血者外周血分离获得。0.3ml EDTA抗凝外周血加入1 ml红细胞裂解液，离心弃上清，沉淀加入170μl核裂解液及4μl SDS，剧烈振荡，再加入72μl NaCl溶液，10000r/min离心5min，取上清加入210μl异丙醇沉淀DNA，将DNA溶于100μl TE溶液中，保存待用。1.4 特异性PCR扩增反应体系11μl,含1μl DNA,8μl引物混合物，1U Taq酶。扩增条件为95℃预变性5min，95℃变性30s,60℃退火30℃s，72℃延伸90s,30循环。PCR产物用2%的琼脂糖凝胶电泳检测，电泳时间为25min。

摘要：目的:建立用于rhd c.1227G>A基因检测的熔解曲线分析方法。方法:根据rhd c.1227G>A基因位点设计并合成序列特异性引物,在荧光定量PCR反应后对产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线峰值的差异进行基因检测结果判断,并与常规序列特异性引物PCR(PCR-sequence specific primer,PCR-SSP)rhd c.1227G>A基因分型方法进行比较;对与血清学结果不一致的标本进行测序分析。结果:在87例血清学初筛为rhd阴性表型的标本中,采用熔解曲线分析法,检测出16例含有rhd c.1227G>A,占比18.4%;与常规PCR-SSP分型结果一致。对1例与血清学吸收放散结果不一致的标本进行rhd exon 9测序分析,证实均为1227A纯合子。熔解曲线分析法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,约登指数为1.0。结论:成功建立用于红细胞rhd c.1227G>A基因分型的熔解曲线分析方法,可以高效、快速地进行rhd c.1227G>A基因检测研究。

摘要：为了探讨rhd阴性福建个体的rhd基因结构，设计14对序列特异性引物，应用PCR—SSP技术检测104名福建省rhd阴性献血者的RH基因型，并对部分样本进行吸收放散试验，同时对2例携带rhd基因rhd阴性样本进行DNA序列测定。结果显示，61．54％阴性福建个体完全缺失rhd基因（rhd^-／rhd^-），25．97％rhd携带rhd1227A等位基因（其中62．96％为rhd^＋／rhd^-杂合子，37．04％为rhd^＋／rhd^＋纯合子），8．65％携带rhd-CE（2—9）-D等位基因，1．92％携带rhd710delC等位基因；多数rhd基因缺失存在于dce单倍体中，发现6例rhd基因缺失存在于dCe单倍体（RH基因型为dce／dCe）中，2例存在于dcE单倍体（RH基因型为dce／dcE）中；同时检测8个rhd基因外显予以及rhd1227A等位基因，以预测rhd表型的准确性明显高于单独检测某个rhd基因外显子的准确性（Χ^2=24．43，P〈0.005）。结论：rhd阴性福建个体rhd基因具有多态性；在中国用rhd基因分型完全替代血清学检测rhd表型的条件尚未成熟。