摘要：目的利用rnai技术干扰胃癌多药耐药细胞(7901/VCR)多药耐药基因(MDR1)的表达,为临床肿瘤的基因治疗奠定基础。方法根据MDR1的碱基序列设计并合成两对短发夹rna,构建重组载体,用阳离子脂质体法体外转染7901/VCR;采用MTT法检测转染胃癌细胞的生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,RT-PCR和Western blot检测转染前后MDR1 mrna和蛋白表达的变化。结果成功构建rnai质粒载体,转染后细胞IC50明显降低(P<0.05);G1期细胞增加,S期细胞减少(P<0.05);MDR1 mrna转录水平下降(P<0.05),P-糖蛋白(P-gp)的表达水平降低(P<0.05)。结论rnai能明显抑制胃癌细胞7901/VCR MDR1mrna和P-gp蛋白的表达,进而对肿瘤细胞多药耐药性有明显的逆转作用,为基因治疗提供了一种新的手段。

摘要：背景:神经元型一氧化氮(NO)与突触可塑性有关,为正常学习记忆的关键递质。神经元型一氧化氮合酶(nNOS)是神经元内NO的生物合成酶。阿尔茨海默病(AD)患者大脑nNOS活性特别是颞叶皮质和海马CA1区nNOS阳性神经纤维的变化尚少见报道。目的:观察自发老年性痴呆模型大脑nNOS活性特别是颞叶皮质和海马CA1区nNOS阳性神经纤维的变化,并观察天泰1号对其nNOS活性的影响。设计:随机对照的实验研究。单位:深圳市中西医结合研究所。材料:实验在深圳市中西医结合研究所二级动物实验室完成。实验动物为65只昆明种小鼠。方法:实验动物饲养至21个月龄,按国际通用标准和方法从老龄动物中筛选老年性痴呆小鼠;实验动物随机分为4组即老年痴呆组、西药对照组、天泰1号小剂量组、天泰1号大剂量组、另设老年学习记忆正常组(简称老年正常组,下同),每组13只。西药对照组给以Hydergine0.6mg/kg,天泰1号小、大剂量组分别予天泰1号6.80g/kg及20.41g/kg,连续60d,老年正常和老年痴呆组均灌以等量双蒸水;用跳台实验(step-downtest)检测学习记忆成绩;脑组织冷冻切片,NBT组织化学法示大脑nNOS活性,全自动显微图像分析系统定量。主要观察指标:①天泰1号不同剂量对自发老年性痴呆鼠学习记忆的影响。②大脑nNOS活性的检测。

摘要：背景:反转录聚合酶链反应用于基因表达分析越来越显示出其重要性,其中合适的内参基因选择很重要,目前并没有适合于所有体系可作为内参的管家基因。大鼠是常用动物模型,选择合适的大鼠管家基因作为内参尤其必要。目的:比较分析使用最广泛的4个标准管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体rna在老年大鼠肝、肾、心、肺组织和大脑皮质中的表达情况。设计、时间及地点:观察对比实验,于2007-07/08在泰山医学院生命科学研究所分子生物学实验室及泰安市疾控中心病毒检测中心实验室完成。材料:选用老年SD大鼠3只,用于检测管家基因表达情况。方法:采用反转录实时荧光聚合酶链反应技术检测老年大鼠肝、肾、心、肺组织和大脑皮质中有着不同表达丰度和功能的4个管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶、β-肌动蛋白、酸性核糖体磷蛋白P0及18S核糖体rna的表达情况。主要观察指标:老年大鼠不同组织内4个管家基因的表达水平及不同组织间的表达差异。结果:①酸性核糖体磷蛋白P0在老年大鼠不同组织间表达差异最小。②老年大鼠肾组织中表达最稳定的管家基因是β-肌动蛋白;心脏组织和肺组织中表达最稳定的管家基因是3-磷酸甘油醛脱氢酶。结论:老年大鼠组织间信使rna分析仅用1个内参基因是不合适的,至少应该使用两个参照基因,1个选用18S核糖体rna;另一个基因的选择标准如下:适用于分析不同组织间基因表达情况的内参基因是酸性核糖体磷蛋白P0,而心脏和肺组织研究适用3-磷酸甘油醛脱氢酶,肾组织研究适用β-肌动蛋白。

摘要：背景:周期素依赖性蛋白激酶5是周期素依赖性蛋白激酶家族的成员之一,脑发育过程中周期素依赖性蛋白激酶5m rna 及其蛋白在脑内的表达及分布状况与神经退行性变思维认知学的关系一直被研究者关注。目的:探讨大脑发育过程中的周期素依赖性蛋白激酶5对神经系统的发生和退行性变的影响。设计:单因素方差分析实验。单位:解放军第一军医大学组织学与胚胎学教研室和神经生物学教研室。材料:实验在解放军第三军医大学组织学与胚胎学实验室完成。W istar大鼠胚胎期(E8～E21)、新生期(P0～P15)、幼年期(P16～2个月)、成年期(>2个月)及老年期(>8个月后)5个阶段25只大鼠,每组5只。方法:采用胚胎期至老年期大鼠脑片行原位杂交组织化学和免疫细胞化学染色。主要观察指标:不同脑区内周期素依赖性蛋白激酶5m rna 及其蛋白的阳性细胞分布及表达状况。结果:25只大鼠全部进入结果分析。①周期素依赖性蛋白激酶5mrna 在大鼠E14～P350整个发育过程中均有表达,成年后趋于稳定;周期素依赖性蛋白激酶5mrna 主要定位于神经元,阳性区域主要分布于大脑皮质、海马、丘脑、下丘脑、小脑及部分神经核团。②出生后周期素依赖性蛋白激酶5表达较强,胚胎及老年鼠表达较弱;阳性区域集中在室周区、海马、小脑及部分神经核团内;老年鼠仅在海马、小脑蒲肯野细胞层内表达。结论:脑内周期素依赖性蛋白激酶5的作用贯穿了整个神经发育的各个时期,在新生期、幼年期有较为显著的表达,成年后表达下降,尤以老年期显著。老年大鼠海马内周期素依赖性蛋白激酶5的表达下调可能与老年性学习记忆减退的发生密切相关。

摘要：背景:研究发现,肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor-alfa,TNF-α)在急性实验性变应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis,EAE)的发病机制中起着重要作用,它可以介导少突胶质细胞的凋亡及脱髓鞘,是EAE脑内重要的炎性细胞因子之一。目的:探索EAE豚鼠脑白质TNF-αmrna的表达以及己酮可可碱、培高利特对其表达的影响。设计:随机对照实验。地点和对象:研究在重庆医科大学附属第一医院神经病学研究所完成,重庆医科大学动物实验中心提供的成年、体质量200～350g豚鼠为研究对象。方法:采用免疫诱导方法制备EAE豚鼠模型,应用RT-PCR方法检测EAE豚鼠脑白质TNF-αmrna的表达。主要观察指标:①成功制模。②TNF-αmrna表达的半定量分析。结果:EAE组豚鼠脑白质TNF-αmrna的表达(1.11±0.06)明显高于对照组(0.32±0.02)(P<0.01),治疗组(0.51±0.03,0.76±0.03)较EAE组表达下降(P<0.05)。结论:急性EAE豚鼠脑白质TNF-αmrna的表达上调,与疾病的触发有关,己酮可可碱、培高利特对TNF-αmrna的表达具有不同程度的抑制作用。

摘要：目的探讨利用rna干扰方法抑制内皮细胞韦伯潘力氏小体(WPB)释放的效果和意义,为防治心血管病和开发小分子rna药物奠定基础。方法设计腺病毒介导的针对调节WPB释放的关键蛋白N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感因子(NSF)N端功能区的小发卡rna(shrna),筛选鉴定收获病毒,使用NSF shrna转染人主动脉内皮细胞为实验组、阴性对照病毒感染为阴性组、不加任何干扰为空白组,RT-PCR和Western blot法观察对NSFmrna及蛋白表达的抑制作用,免疫荧光染色观察对WPB释放的影响。结果用携带NSF shrna的腺病毒感染内皮细胞后,实验组NSF mrna表达与空白组(P=0.02)及阴性组(P=0.035)比较,差异有统计学意义;实验组NSFmrna表达随时间延长持续下降,24、48及72 h明显下降,差异有统计学意义(P=0.048)。实验组NSF蛋白表达,与空白组(P=0.031)及阴性组(P=0.004)比较.差异有统计学意义;而空白组与阴性组差异无统计学意义(P=0.249)。免疫荧光染色显示,NSF-shrna腺病毒感染,明显抑制凝血酶诱导的WPB释放。结论携带NSF-shrna的腺病毒感染人主动脉内皮细胞,能明显抑制NSF mrna及蛋白表达,抑制凝血酶诱导的WPB释放,对未来动脉粥样硬化及急性冠状动脉综合征的防治有一定的参考价值。

摘要：目的探讨DNA分枝结构特异性内切酶-1(FEN1)基因敲低细胞株及对照细胞株的差异表达基因,用实时荧光定量PCR方法进行结果验证。方法从293T野生型及293T FEN1敲低细胞株中提取rnas,并反转录成cDNA;挑选10个转录组测序中差异表达的基因,设计引物,利用SYBR Green染料法,定量检测挑选基因的表达情况。结果挑选的10个差异表达基因中,成功扩增了其中7个基因;通过实时荧光定量PCR方法对两组细胞的7个基因进行定量检测发现,与转录组测序结果相比较,其中有2个没有明显差异,另外5个基因荧光定量方法的检测结果与转录组测序结果一致。结论在细胞内基因表达水平检测中,为提高转录组测序结果的可靠性,还需通过实时荧光定量PCR方法对其结果进一步验证。