摘要：目的 :构建人转化生长因子beta 1(TGFβ1)正、反义基因真核表达载体。方法 :从人胎脑的cDNA文库中扩增出TGFβ1共 12 84bp长的DNA片段后 ,与T载体直接进行高效连接 ,并测序证实无突变。接着利用TGFβ1引物两端所设计的酶切位点将目的片段定向亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )。构建的正反义表达重组体 (pcDNA3.1 TGFβ1和pcDNA3.1 antiTGFβ1)经限制性内切酶消化证实其中有目的片段完整插入。结果 :本实验成功构建了人正、反义TGFβ1基因真核表达载体。结论 :人正、反义TGFβ1基因真核表达载体的构建 ,为今后研究腹膜纤维化的防治奠定了实验基础。

摘要：目的研究趋化因子受体CXCR4反义核酸转染对结肠癌细胞HT-29血管内皮生长因子-C(VEGF-C)mrna功能性表达和其体外侵袭能力的影响。方法利用自行设计的引物,借助RT-PCR技术获得两端含不同限制性酶切位点的CXCR4cDNA片段,反向插入pcDNA3.1(+)质粒中,构建CXCR4反义真核表达载体。以脂质体转染法将质粒导入HT-29细胞,用RT-PCR检测其对HT-29细胞VEGF-C mrna表达的影响,Western blot检测HT-29细胞CXCR4蛋白表达的变化,MTT法测定HT-29细胞的生长曲线,体外侵袭实验观察转染前后HT-29细胞体外侵袭能力的变化。结果成功构建了CXCR4反义重组质粒。与未转染(HT-29)组表达的VEGF-C mrna相比,CXCR4反义核酸转染(HT-29tran)组的表达量下降54.2%,而空白质粒转染(HT-29KZ)组的表达量仅下降9.4%,HT-29tran组和HT-29KZ组相比差异显著(P<0.01)。穿膜细胞百分率HT-29tran组为61.3%±5.8%,而HT-29KZ组为93.7%±7.8%,两组相比差异显著(P<0.05)。结论CXCR4反义核酸转染可明显抑制HT-29细胞VEGF-C mrna的表达,并可显著降低HT-29细胞的体外生长和侵袭能力。

摘要：目的构建反义MBD1基因片段真核表达载体,为研究MBD1基因功能提供工具。方法根据MBD1基因cDNA序列中编码序列,设计PCR引物,在引物5′端分别添加Xba I和Kpn I 酶切位点,将PCR片段反向插入真核表达载体pcDNA3．1(+)的多克隆位点上,构建反义MBD1基因片段真核表达载体,并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定。结果PCR鉴定得到322 bp特异性条带, 双酶切得到327 bp目的基因片段和5．4 kb载体片段,DNA测序说明插入片段序列是正确的。结论采用基因克隆技术,成功构建了反义MBD1基因片段真核表达载体,为研究MBD1基因在DNA甲基化和肿瘤发生中的功能提供了实验工具。