摘要：目的:构建针对人血管内皮生长因子c小干扰rna表达载体,并观察其在胃癌细胞中的干扰效果。方法:实验于2006-02/2007-02在河南省分子医学重点学科开放实验室完成。①实验材料:小干扰rna表达载体pSilencer3.1为美国Ambion公司产品;胃癌细胞SGc7901为河南省分子医学重点学科开放实验室保存;血管内皮生长因子c基因的干扰片断和聚合酶链反应引物(152bp)由上海生工生物公司合成。②实验过程:根据pSilencer3.1-H1载体要求设计靶向血管内皮生长因子c基因的两对小干扰rna,退火后连接入载体相应位点,构建重组表达质粒。经酶切和测序鉴定后分别转染胃癌细胞株SGc-7901,经G418筛选,获得稳定表达的细胞株。③实验评估:采用反转录-聚合酶链反应和Westernblot法检测血管内皮生长因子cmrna和蛋白水平的表达。结果:①重组质粒的酶切、核苷酸序列分析结果:经酶切和测序鉴定证实成功构建了血管内皮生长因子c小干扰rna表达载体,建立了稳定转染细胞株。②稳定转染的细胞株中血管内皮生长因子cmrna和蛋白表达:反转录-聚合酶链反应和Western blot显示转染后血管内皮生长因子c表达与对照组相比有不同程度的降低,以pSilencer3.1-neo-VEGF-c1尤为明显,抑制血管内皮生长因子c表达,不影响细胞的生长。结论:成功构建了血管内皮生长因子c小干扰rna表达载体及稳定转染的胃癌细胞株。