摘要：目的采用长链非编码rna（long non-coding rna，lncrna）高通量测序技术检测氧诱导视网膜病（oxygen-induced retinopathy，OIR）新生小鼠和正常新生小鼠视网膜组织lncrna的差异表达情况，为早产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity，ROP）的发病机制研究提供依据。 方法清洁级C57BL/6J新生小鼠48只，按随机化配对设计分为OIR组和对照组，每组24只。生后第7天，将OIR组小鼠与母鼠饲养于密闭有机玻璃箱内，氧浓度（75±2）%，于生后第12天恢复在空气中饲养，继续饲养5 d。对照组小鼠一直饲养于正常空气环境中，至生后第17天。生后第17天，2组小鼠处死后摘除眼球，荧光显微镜观察视网膜血管形态与分布，光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目，同时采用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）对高通量测序得到的差异表达lncrna进行验证。基于lncrna与mrna表达相关性以及lncrna与mrna基因组位置近邻关系，得到lncrna的潜在靶基因。同时通过GO和KEGG Pathway分析对lncrna表达谱进行初步生物信息学分析。采用t检验及Graphpad Prism对数据进行统计分析及绘图。 结果lncrna高通量测序技术分析获得1 118条与OIR相关的lncrna（差异表达倍数≥2倍，P〈0.05）。采用实时荧光定量PCR验证结果表明，OIR组XLOC_150632、XLOC_150636表达明显上调，XLOC_122045、XLOC_100454、XLOC_170009、XLOC_122042表达明显下调。差异表达lncrna的靶基因经GO分析有852个靶基因富集于生物学进程，1 148个靶基因富集于细胞组件，2 100个靶基因富集于分子功能；Pathway分析36个显著富集的生物学通路，主要涉及视网膜发育、血管内皮细胞趋化、迁移及能量代谢。 结论OIR小鼠视网膜组织中lncrna存在差异表达，其中XLOC_150632、XLOC_150636潜在靶基因成纤维细胞生长因子2与磷脂酰肌醇-3激酶通路相关，可能与OIR视网膜新生血管形成相关。

摘要：卵巢癌是致死率最高的妇科生殖系统恶性肿瘤。因其起病隐匿,诊断时常已处在较难治愈的晚期阶段,且常反复出现药物抵抗及复发转移,导致不良预后结局,5年生存率仅为25%~30%左右。因此,更敏感、更高效的诊断方法和治疗靶点有待被发现。近年来,长链非编码rna(lncrnas)成为肿瘤学领域的研究热点,学者们在多种人类恶性肿瘤中发现lncrnas表达异常并参与调控肿瘤的发生发展进程,提示其可作为新兴的诊断标志物或治疗靶点。本文综述近年来卵巢癌中lncrnas的研究进展,分析这些lncrnas在卵巢癌的发生和发展过程中的调控作用,及其与相关微小rna相互作用的情况。

摘要：目的 构建可竞争抑制肝细胞内0610009E02Rik长链非编码rna（lncrna）的重组腺病毒穿梭载体,为探索0610009E02Rik/Notch1在肝静脉闭塞病（HVOD）肝细胞损伤修复中的作用提供有效实验方法.方法 采用基因组DNA提取试剂盒对截取的C57BL/6小鼠尾进行基因组DNA的提取,通过PCR扩增出0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠的1 000 bp基因序列,并连接入经BamHⅠ/Nhe Ⅰ双酶切后的腺病毒穿梭载体GV359;竞争抑制0610009E02Rik lncrna重组腺病毒穿梭载体与辅助包装质粒pBHG共转染HEK293细胞,并对竞争抑制0610009E02Rik lncrna重组腺病毒进行包装、扩增,采用氯化铯（CsCl）不连续密度梯度离心与连续密度梯度离心2个步骤对重组腺病毒进行浓缩纯化,并对重组腺病毒滴度进行测定;测定不同感染复数（MOI）竞争抑制0610009E02Rik lncrna重组腺病毒感染肝细胞株H2.35的感染效率,并采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blotting对竞争抑制0610009E02Rik lncrna重组腺病毒感染肝细胞株H2.35与同步培养的对照肝细胞中竞争抑制0610009E02Rik lncrna片段、Notch1 mrna及0610009E02Rik lncrna相对表达水平及其蛋白表达水平,并进行统计学分析.结果 ①经基因序列比对分析发现0610009E02Rik与Notch1的第34个外显子存在分子量为1 000 bp的重叠序列,依据0610009E02Rik与Notch1基因序列设计含BamH Ⅰ/Nhe Ⅰ酶切位点特异性引物,通过PCR扩增出片段长度为1 000 bp的0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠序列的竞争抑制0610009E02Rik lncrna片段,DNA测序结果显示竞争抑制0610009E02Rik lncrna重组腺病毒穿梭载体与理论预期序列构建成功.②将竞争抑制0610009E02Rik lncrna重组腺病毒穿梭载体转染HEK293细胞后第12天,约90％细胞出现细胞病变（CPE）,收集细胞获取病毒液.浓缩纯化病毒液经梯度稀释在感染HEK293细胞后第10天,于显微镜下观察稀释梯度1∶ （10～1010）均出现CPE,病毒滴度约为5.01×109 PFU/mL.③当竞争抑制0610009E02Rik lncrna重组腺病毒MOI为80,感染肝细胞株H2.35 48 h后感染效率高达95％.收集经竞争抑制0610009E02Rik lncrna重组腺病毒感染后肝细胞,通过RT-PCR检测竞争抑制0610009E02Rik lncrna片段相对表达水平为同步培养肝细胞株H2.35对照的3.13±0.83倍,且差异有统计学意义（P=0.047）;Notch1 mrna相对表达水平为对照细胞的（0.38±0.08）倍,且差异亦有统计学意义（P=0.010）;0610009E02Rik lncrna相对表达水平为对照细胞的（1.04±0.26）倍,但差异无统计学意义（P＞0.05）.经Western blotting检测发现,重组腺病毒感染后肝细胞Notch1蛋白表达水平较对照肝细胞减低,与Notch1 mrna相对表达水平检测结果相一致.结论 成功构建竞争抑制0610009E02Rik lncrna重组腺病毒穿梭载体,重组腺病毒感染肝细胞H2.35后,可下调肝细胞内Notch1 mrna表达水平及其蛋白表达水平,这为HVOD肝细胞损伤修复的深层机制研究奠定实验数据基础.

摘要：卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,也是导致女性妇科恶性肿瘤相关死亡的主要原因之一。虽然包括手术和化疗在内的治疗方案取得一定疗效,但卵巢癌患者5年总体生存率仍不令人满意。一是由于多数卵巢癌早期无明显症状,诊断时已是晚期;二是归因于卵巢癌复发率及化疗耐药性的提升。降低卵巢癌患者死亡率的关键是早期诊断和治疗以及对化疗耐药的有效预测。研究与卵巢癌相关的基因和蛋白的表达模式对促进诊断相关生物标志物的产生至关重要,并为药物设计、治疗和耐药性提供新的研究靶点。近年来,长链非编码rna(long non-coding rna,lncrna)的作用日益凸显。已在包括癌症在内的许多疾病中发现lncrna的异常表达,但其在疾病病因学和生物学的确切作用尚不清楚。随着对卵巢癌发病机制的深入研究,已有报道lncrna的异常表达与铂类/紫杉醇耐药有关。综述近年来lncrna在卵巢癌化疗耐药方面的研究进展。

摘要：目的制备新型的靶向长链非编码rna(lncrna)同源异型盒基因转录的反义基因间rna(HOTAIR)的反义寡核苷酸(ASON)探针^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON(HYNIC为联肼尼克酰胺),探讨其对人脑胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响。方法设计并通过化学修饰合成HOTAIR的ASON,使用双功能螯合剂HYNIC偶联^(99)Tc^(m)并进行纯化。采用快速薄层层析(ITLC)法和琼脂糖凝胶电泳分别检测探针的标记率、放射化学纯度、体外稳定性及完整性。细胞摄取实验分为2组:Lipo-^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON组(转染组)和^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON组(未转染组),通过脂质体转染探针,测定人脑胶质瘤U87细胞对探针的摄取率;细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验和细胞划痕实验分为3组:Lipo-^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON组(转染组)、^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON组(未转染组)、^(99)Tc^(m)-Control组(对照组),分别检测转染探针后细胞增殖和迁移能力的变化。2组间比较采用Student t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON的标记率为(90.0±5.6)%。琼脂糖凝胶电泳结果显示,^(99)Tc^(m)与探针成功标记并且没有明显的降解,探针孵育12 h的放射化学纯度>80%。细胞摄取实验结果显示,转染后5 h,探针Lipo-^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON在人脑胶质瘤U87细胞中的摄取率最大(0.70%),与未转染组(0.16%)相比,差异有统计学意义(t=17.81,P<0.01)。CCK-8实验结果显示,转染探针Lipo-^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖能力,与未转染组相比,在各个时间点(1、2、3、4、5 d)的差异均有统计学意义(t=2.336~30.230,均P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,转染探针Lipo-^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的迁移,3组细胞间隙融合率的差异有统计学意义(F=331.8,P<0.01),与未转染组相比,转染组细胞间隙融合率明显降低,且差异有统计学意义(60.0%对23.6%,t=51.54,P<0.01)。结论成功合成了靶向人脑胶质瘤lncrna HOTAIR的探针^(99)Tc^(m)-HYNIC-ASON,该探针具有良好的体外稳定性和靶向结合能力,能够抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖和迁移。