摘要：目的:利用双向启动子型rna干涉载体pRHU构建随机rna干涉文库。方法:分别构建基于pRHU载体的绿色荧光蛋白EGFP和p53的干涉质粒,验证双向启动子型rna干涉载体的可用性。设计合成满足pRHU载体特点的干涉文库随机模板,经PCR扩增克隆入pRHU载体,转化感受态细胞获取随机干涉文库。随机挑选20个菌落测序,评价随机文库质量。结果:双向启动子型rna干涉载体pRHU能在哺乳动物细胞中对外源基因EGFP和内源基因p53进行有效的干涉,表明该载体是一个有效的干涉载体,可以用于构建随机rna干涉文库。本研究采用的构建策略可在较短时间内,用50μg pRHU载体获得4×106个克隆。随机挑选20个克隆测序结果表明均插入了GN17-19序列,并且不存在序列重复性。结论:采用本研究的构建策略可以简便快速地利用双向启动子型干涉载体成功构建随机rna干涉文库,为进一步筛选功能基因奠定了基础。

摘要：以高油大豆"中豆30"开花后30 d的发育种子为材料,根据已报道的拟南芥脂肪酸合成相关转录因子LEC1序列设计简并引物,采用同源序列法从大豆种子中分离了大小为850 bp的cDNA片段;采用Gateway技术构建rnai表达载体pHGlec;分别利用大豆子叶节和胚尖为外植体进行农杆菌介导的遗传转化;以抗性芽获得率,PCR检测阳性率为指标,对转化系统进行优化。确定了6.0 mg.L-1的6-BA为胚尖转化法最佳激素配比;经PCR鉴定,优化后的胚尖转化法阳性苗获得率为7.58%,子叶节转化法转化率为1.86%。