摘要：rnascope是以新型探针设计为优势的新一代原位杂交技术,现正逐步应用于多个研究领域,研究范围亦在不断拓展之中。我国肝病人口基数大,基于组织学生物信息检测及研究评价的需求性大,该技术有独特原位水平的特异性与敏感性,弥补了免疫组织化学与传统原位杂交的技术缺陷。实现多重性及单分子水平检测,可在肝病领域多个方面进行核酸水平的定性、定量分析并与组织原位结合实现可视化评价以凸显"金标准"的价值。现就近年来rnascope技术在肝脏组织学方面的应用进行综述。

摘要：为了直观、高效、特异性地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞和组织中PRRSV RNA,本研究根据HP-PRRSV Hu N4株ORF7基因序列设计8对28 bp^36 bp双"Z"结构的寡核苷酸探针(PRRSV-Nprobes),建立了一种新的PRRSV RNA原位杂交检测的方法。该方法能特异性的检测PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中PRRSV RNA,而对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)感染PAMs中的核酸呈现阴性。应用该方法检测PRRSV感染仔猪肺脏、腹股沟淋巴结和胸腺石蜡包埋组织切片中PRRSV RNA,在感染的腹股沟淋巴结中PRRSV RNA呈现集中分布,而PRRSV RNA在肺脏和胸腺中呈弥漫性分布。该方法可用于细胞和组织中核酸的定位及分布规律的研究,特别是用于病毒含量较少的潜伏感染的检测,为PRRSV实验室检测和致病机理研究奠定了良好的试验基础和技术支持。

摘要：rnascope原位杂交是一种检测细胞内靶标RNA的新型检测技术,为验证该技术能否用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒-猪圆环病毒2型(PRRSV-PCV2)的共感染,本研究针对PRRSV N基因和PCV2 Rep基因序列,分别设计两组特异性探针,利用rnascope原位杂交技术分别检测了PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)以及一例PRRSV-PCV2共感染猪的多个组织样品,同时采用间接免疫荧光试验(IFA)以及rnascope原位杂交联合IFA对PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的PAMs进行检测。结果显示,通过rnascope原位杂交技术检测PRRSV N基因和PCV2 Rep基因检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;通过IFA检测PRRSV Nsp9蛋白和PCV2 Cap蛋白检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;两种方法联合使用结果显示,通过rnascope探针检测PRRSV N基因和IFA方法检测PCV2 Cap蛋白,或者通过rnascope探针检测PCV2 Rep基因同时用IFA方法检测PRRSV Nsp9蛋白来检测同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染。同时,rnascope原位杂交技术能够在PRRSV-PCV2共感染猪的肺脏、脾脏和淋巴结的组织切片中检测到PRRSV和PCV2共感染的细胞。以上结果表明rnascope原位杂交技术适用于PRRSV-PCV2共感染的细胞和组织样品的检测,为研究PRRSV-PCV2共感染及协同致病机制奠定了基础。