摘要：参照GenBank已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型代表株VR-2332的ORF6(M蛋白)基因序列,设计1对引物,扩增大约420 bp的基因片段,建立检测PRRSV的rt-pcr方法,同时应用该方法对PRRSV美洲毒株、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)及空白对照进行检测。结果显示,除PRRSV外,CSFV、PRV、PCV及空白对照的检测结果均为阴性。将250μL细胞培养的PRRSV提取RNA后,依次稀释成10-1～10-8,均能扩增出明显的目的条带;且多次重复均能得到一致的结果。表明本研究建立的rt-pcr方法具有特异性强、敏感性高、重现性好的优点。用此方法对信阳市10县区疑似PRRS病例进行临床检测,检测病料478份,检出阳性病料265份,阳性率为55.4%。

摘要：以台湾株丙型肝炎病毒的非结构区基因序列(HCV-T_3)设计内外五条呈巢式排列的引物,结合AGPC核酸一步抽提法,寡聚核苷酸探针5′末端标记法和Southern电泳转移杂交法,建立简捷特异检测HCV-RNA的逆转录一多聚酶链反应(rt-pcr)技术。应用这一技术对121例非甲非乙型肝炎患者和45例抗HCV阳性的慢性乙型肝炎患者进行了血浆HCV-RNA检测,结果阳性率分别为66.1％(80/121)和66.7％(30/45)。本文对这一技术的方法学、HCV-RNA与抗HCV的关系、血液暴露史对HCV感染的意义以及HBV与HCV的重叠感染进行了讨论。

摘要：根据所有已报道的猪瘟病毒株(HCV)和牛病毒性腹泻病毒株(BVDV)的序列设计了3条引物Pa、Pb、Pc。应用rt-pcr技术,引物对Pa/Pb从猪瘟HCLV株、猪瘟Thiveral株、3株猪瘟野毒株都扩增出了预期185bp的片断,Pa/Pc从BVDVOregonC24V株中也扩增出了240bp的片断,而Pa/Pb与牛睾丸原代细胞、PK-15细胞、BVDVOregonC24V株均无反应,Pa/Pc也不与所试验的5株猪瘟毒株反应。采用多重pcr可以从同时含有HCV和BVDV核酸的样品中扩增出各自的特异性条带。针对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的特异性插入序列,设计了引物Pr、Pra、Prb,可以从HCLV细胞毒或用HCLV人工感染的兔脾组织毒中扩增出预期200bp的片断,而Pr、Pra、Prb与猪瘟Thiveral株和3株猪瘟野毒株均不反应。通过含毒量梯度试验,得出了rt-pcr可检测猪瘟病毒量的下限为200RID或200TCID50。

摘要：以扇叶病株为材料 ,根据病毒外壳蛋白核苷酸序列 ,设计特异引物P1(10 6 4 10 83) ,P2 (76 2 781) ,建立了以RNA为模板的GFLV的rt

摘要：根据文献 ,设计和合成内外两对扩增猪流行性腹泻病毒M基因的引物 ,应用嵌套式rt pcr技术检测病猪群的粪便 ,扩增出 85 4bp和 4 12bp的目的基因片段。表明导致猪群发病的病毒为PEDV。

摘要：根据Genbank收录的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的VP1基因保守序列,设计合成特异性引物,建立了检测DHV-Ⅰ的rt-pcr方法,并确定了该方法的特异性与灵敏性;对DHV-Ⅰ分离毒株进行rt-pcr检测均得到阳性扩增结果,而作为阴性对照的常见4种鸭病病原如鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、鹅副粘病毒均未成功扩增;对DHV-Ⅰ临床病料进行rt-pcr检测,检测结果与病毒分离结果一致。结果表明,建立的DHV-Ⅰ的rt-pcr技术具有快速、特异、灵敏的特点。

摘要：烟草丛顶病（tobacco bushy top disease）是近年来在我国云南省西部的保山、大理、楚雄等烟区爆发流行的一种毁灭性烟草病害。截至2001年，云南省累计发病面积达4万hm~2，平均发病率约为15%，造成了上亿元的经济损失。该病的病原物研究长期处于争论状态，被暂时命名为“云南烟草丛枝病（tobacco witches' broom disease）”，植原体学说、新的病毒病学说等都曾经长期占据人们的视野。Mo等明确了该病是由烟草丛顶病毒（Tobacco bushy top virus, TBTV）和烟草脉扭病毒（Tobacco vein distorting virus, TVDV）引起的烟草丛顶病。

摘要：目前，用于软组织肉瘤（soft tissue sarcoma，STS）染色体易位或其融合基因检测的技术方法很多，以逆转录聚合酶链反应（rt-pcr）方法最为常用。然而对于一些形态学缺乏特征性排列结构的小圆细胞肿瘤，运用rt-pcr技术对不同融合基因逐一检测和排除，也存在检测程序繁琐、耗时、耗材等不足。针对此问题，我们设计了多重引物，应用多重rt-pcr技术检测石蜡包埋STS融合基因的表达，建立一套稳定高效、适合临床常规STS融合基因表达检测的分子诊断方法。

摘要：根据GenBank中鸡卵泡抑制素α亚基序列设计引物,对该序列按大肠杆菌嗜好密码子进行优化,在设计的引物两端分别加上限制性内切酶SacⅠ和XhoⅡ的识别位点序列。利用rt pcr技术从溆浦鹅卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素α亚基成熟区序列,经pcr扩增出354 bp片段,该片段与pMD18 T载体连接,转化JM109感受态细胞,所得阳性克隆进行双酶切鉴定和pcr鉴定,并进行了测序分析,得到的克隆序列与设计的序列基本一致。表明成功地获得了抑制素α亚基编码序列的克隆载体。从阳性细菌中提取质粒,经SacⅠ和XhoⅠ酶切,回收354 bp目的片段,定向克隆到pET28a中,转化DH5α受体菌,提取质粒,再转化到BL21(DE3)中,成功筛选出阳性克隆。阳性菌经IPTG诱导,通过SDS PAGE,检测出溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区的表达。

摘要：以藜科植物山菠菜甜菜碱醛脱氢酶 (BADH)基因的保守区设计引物 ,通过rt pcr技术 ,从三角叶滨藜cDNA中分离了两个BADH基因片段BADH3 和BADH5,并利用巢式pcr、cRACE以及 3′ RACE获得全长BADH3 。测序结果表明 ,BADH3 和BADH5之间的核苷酸同源性为 81 % ,其推测的氨基酸序列同源性 80 %。全长BADH3 核苷酸序列长 1 81 5bp ,79～ 1 5 78bp为一个开放阅读框架 ,推测的氨基酸序列全长 5 0 0个氨基酸残基 ,相对分子质量为 5 4 70 0 ,pI为 5 5。其核苷酸序列和推测的氨基酸序列与山菠菜同源性分别为 95 %和 93%。由三角叶滨藜 3′端部分BADH基因的克隆gBADH1 和gBADH2 推测的外显子序列分别与BADH5和BADH3 完全一致 ,且gBADH1 和gBADH2 的内含子插入位置和大小有较大差异。表明三角叶滨藜BADH基因是一个多基因家族 ,至少存在