摘要：由类病毒引起的苹果病害在中国苹果主产区普遍发生,严重制约苹果产业的健康发展。对采自不同地区的带有典型症状的弘前富士、南方脆及惠民短枝富士果实,进行苹果锈果类病毒(ASSVd)和凹果类病毒(ADFVd)检测,发现两种病毒能够共侵染。根据ASSVd和ADFVd保守序列设计通用引物,建立了能快速、同时检测两种类病毒的rt-pcr方法。

摘要：建立rt pcr检测猪瘟病毒的方法。根据已发表的猪瘟病毒E2基因 (囊膜糖蛋白gP55基因 )序列 ,设计合成了一对特异性引物 ,扩增片段的大小为 50 7bp ,用rt pcr技术对石门系标准株和 1 0株分离株进行检测。结果这对引物对标准株和 1 0株分离株均能扩增出与预期大小相符 50 7bprt pcr产物 ,而对其他 6种猪病病原核酸的扩增结果为阴性。该rt pcr可检出 1 0 0pg的猪瘟病毒RNA模板 ,对人工感染猪不同组织样品进行检测 ,结果对白细胞抽提的核酸样品检出率最高为 1 0 0 % (2 4 / 2 4 ) ,其次为扁桃体、脾、肾 ,检出率为 83 3 % (2 0 / 2 4 ) ,再者为淋巴结 ,检出率为66 7% (1 6/ 2 4 )。对送检的 1 9份疑似猪瘟的病死猪病料组织进行rt pcr检测 ,结果有 1 6份样品为猪瘟病毒阳性。兔体交叉反应试验结果rt pcr阳性的 1 6份病料中 ,有 1 4份样品被判为含有猪瘟病毒 。

摘要：根据犬瘟热病毒H基因核苷酸序列 ,设计合成一对引物对贵州临床诊断为犬瘟热 (CD)病死犬的心、肝、脾、肾、粪便进行rt pcr检测。结果表明 :从心、脾、肾病料上清液中可扩增出 760bp的特异性带 ,与预期扩增片段长度相同 ;粪便和肝脏上清液rt pcr结果为阴性 ,但粪便上清液接种Vero细胞后连续传代 3代 ,每代细胞培养液rt pcr结果均为阳性 ;在检测的 2 2条病死犬中 ,有 1 9条病死犬检测到犬瘟热病毒H基因的特异性核酸片段 ,阳性率为 86 4% (1 9/ 2 2 )。

摘要：为明确侵染广东省冬种马铃薯的病毒种类及优势病毒,结合小RNA深度测序技术及rtpcr检测方法,对采集于广东省冬种马铃薯7个主产区的189份疑似病样进行检测分析。结果表明,经小RNA深度测序技术检测马铃薯病毒病混合样,发现存在马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)和马铃薯卷叶病毒(Potato leaf-roll virus,PLRV)3种病毒。进一步设计3种病毒的特异性引物并利用国内已报道的其它5种马铃薯病毒的特异性引物进行rt-pcr检测,发现189份马铃薯病毒病疑似病样中仅检测到PVY、PVS和PLRV这3种病毒,检出率依次为75.13%、10.05%和4.76%,且3种病毒在马铃薯上还存在复合侵染,复合侵染率为14.19%,其中PVY在各马铃薯产区均可检测到。表明侵染广东省冬种马铃薯的病毒为PVY、PVS和PLRV,其中PVY是优势病毒。

摘要：为了检测、区分猪传染性胃肠炎 (TGE)和猪流行性腹泻 (PED) ,建立了同时检测这 2种疾病病原体的多重 pcr方法。参考 Gen Bank登录的 TGEV和 PEDV纤突蛋白 S基因序列 ,经 DNAsis 2 .0比较分析 ,分别筛选出 TGEV、PEDV S基因相对保守区。以 TGEV TH- 98株 (Gen Bank登陆号为 AF4 94 337)和 PEDV CV777株 (Gen Bank登陆号为 NC0 0 3436 )为参考模板 ,利用软件 Primer 3设计合成了 2对寡核苷酸引物 ,以 ST细胞培养的 TGEV和 PEDV毒株核酸为模板 ,利用所设计的 2对引物进行多重 rt- pcr扩增 ,结果同时得到与试验设计相符的 4 99bp(TGEV)和199bp(PEDV)的扩增条带 ,而对其他 3种猪病原的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明 ,建立的多重 rt- pcr方法可检测出 10 pg TGEV RNA和 10 0 pg PEDV RNA。

摘要：本文报道从香菇菌丝体和子实体中分离到一种大小约20nm×(100-200)nm的杆形病毒颗粒,病毒基因组是大小约8.0kb的dsRNA。对病毒基因组部分cDNA序列进行克隆,完成1457bp的核酸序列测定(Accession No:GQ372842),该序列含1个不完整ORF,编码314个氨基酸残基,推测为病毒RNA聚合酶部分序列。病毒基因组部分cDNA序列与GenBank中的已知核酸序列无明显同源性,表明它可能是新发现食用真菌病毒。为了对实验室和野外的香菇病毒进行快速检测,我们根据得到的病毒基因组部分cDNA序列设计特异性引物,建立了一种方便、有效检测香菇病毒的rt-pcr方法,对感染病毒异常菌丝体中的病毒成功地进行了检测。

摘要：通过对“一步法”RNA提取方法的改进,简化了提取程序,并保证了RNA的质量。根据马铃薯X病毒(PVX)基因序列设计合成了一对特异性引物,运用反转录pcr(rt-pcr)对PVX-RNA进行扩增,成功得到了与预期大小相一致的308 bp片段,而对照未得到任何产物,同时对反转录酶AMV用量做了不同的处理,得出AMV仅用1u仍能得到较好扩增的效果。从而建立了经济简便的PVX的rt-pcr检测体系,为PVX的防治、脱毒苗的检测提供有效手段。

摘要：为了了解红芽芋茎尖低温疗法再生苗的脱毒情况,本研究对其进行芋花叶病毒(DsMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)和芋羽状斑驳病毒(TFMoV)的rt-pcr检测。大田苗均检出芋花叶病毒(DsMV)和黄瓜花叶病毒(CMV);对于芋花叶病毒(DsMV),玻璃化法低温疗法脱毒率为50%,包埋玻璃化法低温疗法脱毒率为100%,包埋脱水法低温疗法脱毒率为50%,小滴玻璃化法低温疗法脱毒率为75%,茎尖常规培养脱毒率为75%,说明包埋玻璃化法低温疗法有利于脱除芋花叶病毒;对于黄瓜花叶病毒(CMV),玻璃化法低温疗法脱毒率和包埋玻璃化法低温疗法脱毒率均为100%,包埋脱水法低温疗法脱毒率为75%,小滴玻璃化法低温疗法脱毒率为75%,茎尖常规培养脱毒率为50%,说明4种低温疗法脱毒均有利于脱除黄瓜花叶病毒,但玻璃化法低温疗法和包埋玻璃化法低温疗法两种脱毒方式效果更佳。4种低温疗法再生苗、茎尖常规培养再生苗和大田苗中均未检出芋羽状斑驳病毒(TFMoV)。究其原因,可能采用的引物为甘薯羽状斑驳病毒引物,而甘薯和芋头是不同物种,可能病毒序列不一样,且NCBI基因库里没有FMo V的任何信息,完全没有参考序列设计引物,还有待于进一步研究。本实验可为红芽芋脱毒苗的规模化生产提供一定技术基础和理论依据。

摘要：在比较国内外口蹄疫病毒 (FMDV)流行毒株序列的基础上 ,设计了检测 FMDV的 pcr引物及 O型 FMDV不同基因型即中国型 (Cathay)与乏亚株 (Pan Asia)的二联 pcr引物。在确定单项 rt- pcr反应条件的基础上 ,建立、优化了二联 rt- pcr反应体系和条件 ,并进行了相关病毒检测试验。结果表明 ,建立的检测 O型 FMDV不同基因型中国型与泛亚株的二联 rt- pcr,有效、特异且敏感 ,为 FMD的诊断。

摘要：诺如病毒(Norovirus,NoV)是急性胃肠炎暴发的重要病原,其特殊的生物学特性容易引起食品的污染。对食品中NoV的准确检测能为诺如病毒胃肠炎防控提供科学依据。反转录(rt)-pcr技术是目前食品NoV检测的主要方法,检测过程包括病毒富集、RNA提取、引物设计、rt-pcr反应、扩增产物鉴定共5个步骤,其中病毒富集是检测的关键及难点。影响食品中NoV的rt-pcr检测结果的因素较多,目前尚无一种标准的检验方法,因此有必要加快相关检验方法研究,建立高风险食品的病毒检测方法以指导实际工作。