摘要：根据马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)基因序列设计合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,经rt pcr法扩增出全长的cDNA片段,结果从感病组织中扩增出与预期的360bp大小的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将其克隆到质粒pGEM T载体上,进行全序列分析。结果表明,与国内外的报道相比较,核苷酸同源率高达98%以上。pcr产物克隆作为rt pcr反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,为进一步进行抗PSTVd基因工程研究打下了良好基础。

摘要：从表现为叶斑驳、花碎色症状的香石竹病株上获得一病毒分离物 ,电镜负染观察到直径为 2 8～ 33nm的球状粒子。病毒提取液经紫外光测定呈典型核蛋白吸收曲线 ,OD2 60 /OD2 80 =1 70 ;血清学反应与CarMV抗血清出现明显的沉淀线。通过以上实验结果 ,确定该病毒分离物为香石竹斑驳病毒 (carnationmottlevirus ,CarMV)。根据该病毒的RNA序列设计引物 ,对病健材料进行了rt pcr检测 ,结果从感病材料中扩增出大约 6 0 0bp的特异片段 ,而健康植物无此扩增带。将pcr产物连接 pGEM-T-easy载体 ,转化大肠杆菌JM 10 9,得到了含目的片段的重组子 ,经双脱氧序列分析 ,与Guilley报道的序列对应部分的核苷酸序列基本一致 (其同源性达 96 % ) ,最低检出病毒核酸含量为 5ng ,表明应用rt

摘要：为快速检测鸭坦布苏病毒(DTMUV),根据鸭坦布苏病毒E蛋白的基因序列设计一对特异性pcr引物,并以鸭坦布苏病毒基因组为模板,建立了鸭坦布苏病毒的特异性rt-pcr检测方法,进行了特异性和敏感性试验,并用该方法对采自江苏地区的疑似病料进行了检测。结果表明:该方法可以特异性地扩增出鸭坦布苏病毒E蛋白基因保守区514 bp的序列,和对照的其他鸭病毒无交叉反应;敏感性较好,最低可检测到1 fg的基因组;临床样品的检出率为100%。说明所建立的rt-pcr检测方法特异性强、敏感性高,可用于临床快速诊断鸭坦布苏病毒。

摘要：对惠州市冬种马铃薯卷叶病发病情况进行调查研究,建立了马铃薯卷叶病毒(PLRV)rt-pcr检测技术。结果表明,马铃薯卷叶病发病率为3.0%～29.7%。比较LiCl、异硫氰酸胍和试剂盒3种方法提取马铃薯卷叶病毒总RNA,以异硫氰酸胍和试剂盒提取效果较好,LiCl次之;根据卷叶病毒外壳蛋白基因序列设计引物,从感染马铃薯卷叶病毒的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,合成cDNA并运用rt-pcr技术进行体外扩增,得到一条长度约336bp的特异pcr扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而健康叶片RNA扩增未得到任何产物。应用rt-pcr技术对马铃薯试管苗和种薯进行了卷叶病毒检测。

摘要：为调查我省甜樱桃感染樱桃绿环斑驳病毒(Cherry Green Ring Mottle Virus,CGRMV)情况,本研究以甜樱桃(Prunus avium L.)品种"红灯"叶片总RNA为模板,根据CGRMV基因组序列设计特异引物,对山东地区37份甜樱桃"红灯"样品进行rt-pcr检测,共检测出19份阳性样品。利用CGRMV外壳蛋白基因序列引物,从阳性植物样本中分离到约800 bp的目的片段,克隆测序,序列分析显示该片段全长807 bp,编码268个氨基酸,与GenBank中已登录的CGRMV分离物的外壳蛋白基因序列一致性为87%～97%,氨基酸序列相似性为95%～99%。该结果表明山东地区甜樱桃生产园中感染CGRMV的病例较为普遍。

摘要：用小鼠肝炎病毒的MHV1、MHV3、A59、JHM四株分别感染DBT细胞 ,收获病毒 ,提取病毒RNA。依据小鼠肝炎病毒的病毒基因、M结构蛋白、mRNA的基因保守区分别设计出多对引物 ,按各对引物的条件建立了rt -pcr方法 ,比较了不同引物敏感性和特异性 ,并比较选择与MHV同为冠状病毒的传染性支气管炎 (IBV)标准株和野毒株没有交叉的最佳特异引物。敏感性实验检测到 1 0pg的小鼠肝炎病毒RNA。

摘要：以陕北8个县（区）种植2-3代疑似带毒的马铃薯叶片为材料,用Trizol法提取马铃薯叶片总RNA,以已公布的马铃薯卷叶病毒外壳蛋白（CP）基因序列设计特异引物,通过rt-pcr扩增目的DNA片段,对CP基因进行克隆和测序,采用DNAstar软件分析序列的一致性。结果表明,从陕北8个县（区）马铃薯叶片中均扩增到与预期大小一致、长度为336 bp的目的片段,说明马铃薯均感染了卷叶病毒。陕北8个县（区）马铃薯卷叶病毒CP基因之间的序列一致性达99.6%以上,与国内外其他地区10个样品CP基因的序列一致性为96.2%-99.8%,表明马铃薯卷叶病毒的CP基因序列比较保守。

摘要：根据GenBank中已发表的赤羽病病毒(AKAV)的S基因序列,设计了3条特异性引物,建立了检测AKAV的套式rt-pcr方法。特异性试验表明,该方法可以特异扩增出AKAV的S基因片段,但从牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)等13种对照病毒中均不能扩增出目的条带。敏感性试验表明,套式rt-pcr能够扩增10-5稀释度的病毒RNA(核酸含量约1.18 ng/μL),比普通rt-pcr高出1 000倍。用此方法检测130份奶牛血清样品与1份流产胎儿病料,均未检测到阳性样本,但AKAV在血清模拟样品中可被有效检出。研究结果表明,该方法灵敏、特异,为AKAV的检测提供了一个快速、有效的手段。

摘要：以甜樱桃(Prunus avium L.)品种红灯的叶片为材料,提取总RNA,选用随机六聚体引物进行反转录合成cDNA,根据李矮缩病毒外壳蛋白基因设计2对特异引物,分别从感病样品中扩增出与预期片段大小相符的目的片段。通过对rt-pcr反应体系中引物、模板浓度和退火温度的优化,改进了现有的李矮缩病毒的rt-pcr检测方法,并成功用于山东泰安地区甜樱桃果园的病毒调查。另外,还可以扩增18 sRNA,实现对李矮缩病毒外壳蛋白基因表达的相对定量分析。

摘要：目的　建立检测Sendai病毒的rt pcr方法并应用于活疫苗及其生产基质中Sendai病毒的检测。方法　将Sendai病毒E17株接种 9日龄鸡胚尿囊腔 ,72h后收集尿囊液 ,用于提取病毒RNA ,并逆转录成cDNA ,用两对针对Sendai病毒NP基因设计的外引物和内引物分别进行扩增。扩增产物克隆于T 载体 ,并测序。尿囊液按 10倍倍比稀释 ,进行敏感性实验。将该方法用于检测乙脑减毒活疫苗和用于生产疫苗用的普通级乳地鼠肾中的Sen dai病毒。结果　外引物和内引物的pcr分别扩增出 6 84bp和 2 48bp的片段 ,外引物pcr产物的测序结果与Gen bank报告的序列完全一致。敏感性实验结果表明 ,第一次pcr可检测到 10 - 4 病毒滴度 ,巢式pcr可检测到 10 - 7病毒滴度。乙脑减毒活疫苗和乳地鼠肾的检测结果为阴性。结论　建立检测Sendai病毒的rt