摘要：应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制rap1基因的表达,构建rap1 shRNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体,观察其对小鼠肝脏细胞中rap1 mRNA和蛋白表达的干扰作用.根据小鼠rap1 mRNA的全序列,设计了3种rap1 siRNA序列(rap1 siRNA1、rap1 siRNA2、rap1 siRNA3)和阴性对照序列(HK);采用克隆技术,将其插入带有报告基因绿色荧光(EGFP)的pGenesil-3载体,构建rap1 shRNA表达载体;经双酶切和测序证实rap1 siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致;昆明小鼠40只,体重18～20g,随机分成4组:Ⅰ组(转染HK组)﹑Ⅱ组(转染rap1 shRNA1组)﹑Ⅲ组(转染rap1 shRNA2组)﹑Ⅳ组(转染rap1 shRNA3组).于0﹑16﹑24h腹腔内注射rap1 shRNA2.0～2.5mg/kg(用PBS稀释至1mL);48h后收集小鼠肝脏,用显微荧光﹑定量RT-PCT﹑免疫组化检测小鼠肝细胞中rap1shRNA的转染率﹑rap1基因表达以及蛋白质表达水平.Ⅰ组﹑Ⅱ组﹑Ⅲ组﹑Ⅳ组小鼠肝脏细胞体内转染率均大于60%,Ⅱ组﹑Ⅲ组﹑Ⅳ组的rap1 mRNA表达﹑rap1蛋白表达均降低,其中rap1 shRNA1干扰效果最佳.