摘要：马铃薯Y病毒是近年来危害烟草生产的重要病毒之一,严重影响烟草的产量与品质。本研究利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)全基因组序列进行序列比对,设计引物,以烟草肌动蛋白基因为内参,建立了烟草PVY的实时定量检测体系。获得的real-time PCR扩增基线平整,指数扩增明显,斜率大;稳定性和重现性好,变异系数小;循环阈值与PCR起始模板量对数之间存在良好的线性关系。与DAS-ELISA相比,该方法具有高效、灵敏、特异性强等优点,为从分子生物学水平上检测烟草中PVY提供了新的技术手段。

摘要：根据GenBank中报道的绵羊视黄酸受体γ(retinoic acid receptor-gamma,RARG)基因mRNA序列,设计特异性引物,利用real-time PCR技术对绵羊RARG基因的组织表达规律进行了研究,并对其进行了生物信息学分析,为进一步研究该基因的功能提供线索。结果表明,绵羊RARG基因共编码458个氨基酸,其中亮氨酸所占比例最高,为11.10%;该基因编码产物在系统进化树中与牛的亲缘关系最近;RARG基因编码产物二级结构主要以无规则卷曲和α螺旋为主,主要位于细胞核中,是一种水溶性蛋白;real-time PCR结果显示,绵羊RARG mRNA在心、肝、脾、肺、肾、瘤胃、十二指肠、淋巴、下丘脑、垂体、肌肉、睾丸等12个组织中均有表达,其中在睾丸中表达量最高,推测绵羊RARG基因可能参与机体繁殖机能的调控。

摘要：目的建立5-羟色胺2c受体（5-HTR2c）基因mRNA表达水平的TaqMan real—time PcR检测方法。方法以β-actin为内参基因，根据GenBank中人5-HTR2c及β-actin基因序列，分别设计了2套特异性引物和TaqMan探针，接着对反应的退火温度、引物浓度、探针浓度、Mg^2＋浓度进行优化，然后以优化的条件建立相对定量标准曲线，并对该方法的稳定性进行了分析。结果5-HTR2c及β-actin基因的real—time PCR扩增效率分别为99.9％和100.0％；相对定量标准曲线的CT值线性范围分别为12．2～35．1和11．5～31．5，相关系数分别为0．999及1．000；批内及批问变异系数（8．0％。结论本研究所建立的针对5-HTR2c mRNA表达水平的Taqman real-time PCR检测方法具有扩增效率高、稳定性好等特点，为进一步探索5-HTR2c的功能及其mRNA表达水平的变化和各种疾病发生、发展的相关性提供了有用的方法学基础。