摘要：目的 :检测rhoc在胃癌细胞系中的表达 ,并构建其小干扰RNA(siRNA)表达载体。方法 :以Westernblot方法检测rhoc在多株胃癌细胞系中的表达。利用计算机辅助设计rhoc特异性siRNA ,体外合成siRNA基因并将其定向克隆入真核表达载体mU6pro。以脂质体法转染rhoc siRNA载体至高转移的人胃癌细胞系AGS中 ,以Westernblot方法鉴定rhoc siRNA对rhoc表达的作用。结果 :rhoc蛋白在具有高转移潜能的胃癌细胞系中表达增强。利用BbsⅠ和XbaⅠ双酶切法鉴定重组载体后 ,DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确并已被准确克隆入mU6pro载体。rhoc siRNA载体可特异性抑制AGS细胞中rhoc的表达。结论 :rhoc特异性siRNA表达载体成功构建 。

摘要：目的:研究Ras homology C(rhoc)在胃癌转移中的作用。方法:利用Vector NTI软件设计并构建rhoc 的小干扰RNA(siRNA)载体,利用脂质体介导法将一组rhoc siRNA分别转染胃癌SGC7901细胞。筛选出稳定抗性克隆;Western blot检测rhoc siRNA转染后的抑制效应,Cell Counting Kit-8检测rhoc siRNA转染细胞株的生长速度;MTT法检测转染细胞株对化疗药物的敏感性;损伤刮擦实验和TRANSWELL小室实验分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力。结果:在计算机辅助下成功地设计并构建了5个rhoc的小干扰RNA载体,Western blot显示其中一个rhoc的小干扰RNA rhoc-s362对 rhoc的表达有明显的抑制作用;尽管下调rhoc的表达对胃癌细胞的生长和药物敏感性无明显影响,但可显著抑制肿瘤细胞的迁移与侵袭。结论:rhoc siRNA rhoc-s362能够明显抑制胃癌SGC7901细胞中rhoc的表达,并进而抑制胃癌细胞的迁移与侵袭,提示rhoc可能在胃癌转移中发挥重要作用。