摘要：【目的】构建硒结合蛋白1基因(sbp1)过表达与干扰重组慢病毒载体,并通过感染猪骨骼肌卫星细胞验证sbp1基因的过表达和沉默效果,为后续揭示sbp1基因调控肌纤维类型转化及猪肉品质的分子机理打下基础。【方法】在对猪sbp1蛋白进行生物信息学分析的基础上,根据GenBank中猪sbp1基因mRNA序列(XM_021089863.1)PCR扩增sbp1基因全长序列,克隆至过表达慢病毒载体pHBLV-CMV上构建sbp1基因过表达重组慢病毒载体;同时针对猪sbp1基因设计3个干扰靶点序列和1个阴性对照序列,分别克隆至干扰慢病毒载体pHBLV-U6上构建sbp1基因干扰重组慢病毒载体。以构建的重组慢病毒载体感染猪骨骼肌卫星细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞系,并采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测sbp1基因及其蛋白的表达情况。【结果】猪sbp1蛋白分子式为C_(2523)H_(3916)N_(678)O_(727)S_(24),相对分子量为56.14839 kD,理论等电点(pI)为6.40,为稳定的分泌蛋白;存在39个潜在磷酸化位点,包括20个丝氨酸磷酸化位点、6个酪氨酸磷酸化位点及13个苏氨酸磷酸化位点。以构建的sbp1基因过表达与干扰重组慢病毒载体分别感染猪骨骼肌卫星细胞,经嘌呤霉素筛选2代后,在荧光显微镜下均能观察到绿色荧光。实时荧光定量PCR检测结果表明,过表达组的sbp1基因相对表达量极显著上调32.0倍(P<0.01,下同),干扰组中以shRNA-3的沉默效果达极显著水平,对应的sbp1基因相对表达量下调58.45%;Western blotting检测结果显示,过表达组的sbp1蛋白表达量极显著上调,而shRNA-1、shRNA-2和shRNA-3干扰组的sbp1蛋白表达量均极显著下调。【结论】基于猪骨骼肌卫星细胞成功构建了猪sbp1基因过表达稳定表达细胞系,同时鉴定出shRNA-3对sbp1基因的沉默效果最佳并获得稳定沉默细胞系,为后续揭示sbp1基因调控猪肉品质的分子机理打下了基础。