摘要：SCo T是一种新型的目的基因分子标记,该标记不仅能获得与性状联系紧密的目的基因,而且能对性状进行跟踪,已被广泛应用于多种植物的研究。本文概述了SCo T标记的原理、引物设计方法及特点,并从PCR反应体系建立与优化、种质资源遗传多样性与亲缘关系分析、种质鉴定与指纹图谱构建、基因差异表达与分子遗传连锁图谱构建等方面总结了SCo T标记的应用进展。同时,对其存在的问题进行了讨论,并展望了该标记的发展应用前景。

摘要：为进一步开发利用药用菊花种质资源,为药用菊花的遗传多样性及分子鉴定研究提供技术支持,建立并优化药用菊花的目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(scot-PCR)体系,在方差分析基础上,运用L25(56)正交设计在5个水平上对影响药用菊花scot-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物5个因素进行优化试验,并对PCR结果进行分析。建立了药用菊花scot-PCR最佳反应体系(20μL):模板DNA 10 ng,引物0.8μmol·L-1,dNTPs 0.2 mmol·L-1,Mg2+2.0 mmol·L-1,Taq酶1.5 U,scot反应的影响因素依次为:Taq酶>引物>dNTPs>Mg2+>模板DNA。优化的scot-PCR反应体系在多个药用菊花品种遗传多样性研究中得到了验证,结果表现出良好的稳定性、重复性和多态性丰富等特点,该体系的建立为药用菊花品种遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种研究奠定了基础。

摘要：采用正交设计和单因素试验相结合的方法,对铁皮石斛的scot-PCR反应中5个因素(DNA模板、Mg2+、dNTPs、Taq酶和引物)进行优化试验。建立了适合铁皮石斛既稳定且多态性高的scot-PCR的最佳反应体:20μl PCR反应体系中含有1×Buffer、30ng DNA模板、2.5mmol.L-1Mg2+、0.15mmol.L-1dNTPs、1.5U Taq DNA聚合酶和0.4μmol.L-1引物。对铁皮石斛的scot-PCR最佳反应体系的退火温度进行梯度试验,发现本试验引物S6的退火温度为54.5℃,且最适退火温度因引物而异。这一优化的scot-PCR反应体系在32份铁皮石斛材料的验证中表现出良好的稳定性和重复性。该优化的scot-PCR反应体系为进一步进行铁皮石斛种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位和遗传多样性的分析奠定了技术基础。

摘要：本试验对scot反应体系进行优化,并筛选合适的引物,然后对24份试材进行scot标记,获得的目的片段克隆测序,通过测序结果探讨其遗传变异;结果表明,甜橙scot标记的20μL优化反应体系为:DNA模板80ng,Mg2+浓度1.6mmol/L,dNTPs浓度0.3mmol/L,引物浓度0.2μmol/L,Taq DNA聚合酶用量1.6U,扩增产物在100～2000bp之间,扩增条带明亮清晰,反应体系具有良好的稳定性和可重复性。24份试材的测序片段的大小为1090～1091bp,一致性达到99.84%,存在单碱基的缺失与替换,BLAST结果显示,该序列的编码蛋白质与核糖体蛋白S3的N端同源性高;利用单碱基变异可以区分其中的12个甜橙变异株系和'安江香柚',其他变异株系还需要结合其他的分子标记技术来进行鉴别,有待进一步研究。

摘要：为构建红花最佳扩增体系,为以后研究红花遗传多样性和目的基因标记提供了科学依据。本研究采用L_(16)(4^(5))正交试验和单因素试验相结合的方法对红花scot-PCR反应体系中的引物,DNA、dNTPs、PCR Buffer (含Mg^(2+))、Taq DNA聚合酶进行优化,每个因素都设为四水平。结果表明,五个影响因素中dNTPs的影响最大,红花最佳反应体系为引物0.6 mmol/L,DNA 60 ng,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.5 U,PCR Buffer (含Mg^(2+)) 2μL,ddH_(2)O补足至20μL。选用引物S15对八种红花资源对扩增体系进行验证,结果显示扩增条带清晰,多态性好,表明该体系适合红花分子标记研究。

摘要：scot-PCR是一种单引物扩增分子标记方法,具有丰富的多态性,低廉的成本和较好的引物通用性,已在多种植物上加以应用。本研究采用L16(45)正交试验设计,对scot-PCR的影响因素进行优化试验,建立了适用于辣木的最佳scot-PCR反应体系,并对40条scot引物进行筛选。结果表明,25μL最佳反应总体积包含2.0 mmol/L Mg^(2+),0.3 mmol/L d NTPs,1.5 U ExTaq,1.25μmol/L引物,50 ng DNA模板,其中,dNTPs对该体系的影响程度最大。此外,40条scot引物共筛选出15条多态性好且适合辣木扩增的引物。该体系的建立为今后利用scot分子标记分析辣木种质资源鉴定与多样性、构建指纹图谱和辅助选择育种提供新的技术手段。

摘要：采用L25(56)正交试验和单因素试验2种方法对影响大豆scot-PCR反应的Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度和模板DNA用量等因素进行优化,优化后的20μL大豆scot-PCR体系为:Mg2+浓度2.0mmol·L-1、Taq聚合酶用量1.5U、引物浓度0.250μmol·L-1、dNTPs浓度0.2mmol·L-1、DNA模板用量30ng;退火温度最适为50.4℃。运用18个大豆品种验证,该反应体系稳定、可靠,并从82条引物中筛选出条带清晰、多态性较好的32条引物。利用大豆品种吉育75、本地黑豆及其10株F2对该反应体系进行了初步的遗传验证,结果显示,杂交后代植株中出现了双亲的位点和亲本位点的缺失。该反应体系的建立为大豆种质遗传多样性分析、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种提供了新的技术手段。

摘要：本研究以榴莲蜜(Artocarpus integer(Thunb.)Merr.)品种‘多异1号’嫩叶为试材,通过比较5种CTAB法,提取到高质量的榴莲蜜基因组DNA,利用正交设计L25(56)探究了Mg^(2+)、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物及模板DNA用量对榴莲蜜scot-PCR反应的影响,在此基础上对退火温度进行了优化,建立了scot反应体系。结果表明:使用含有4%β-巯基乙醇和12.5 mmol/L硼砂的2%CTAB提取缓冲液,两次抽提后用1/2体积无水乙醇和与上清等体积的4 mol/L LiCl沉淀RNA,能够提取到高质量的基因组DNA;优化后的20μL榴莲蜜scot-PCR反应体系含有Mg^(2+) 2 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶1 U、引物0.375 mol/L、模板DNA 10 ng,最适退火温度48.2℃。该体系可以为榴莲蜜遗传多样性分析、基因定位等提供技术支持。

摘要：采用L25(56)正交设计方法,对影响芥菜scot-PCR反应的Mg2+,dNTPs,Taq酶,引物,模板DNA等因素的浓度进行优化,建立了适用于芥菜研究的scot-PCR最佳反应体系:20μL反应体系中,含有Mg2+1.875mmol/L,dNTPs 0.35mmol/L,Taq酶2.00U,Primer 0.875μmol/L,模板DNA 10ng.利用芥菜的16个品种对该反应体系进行验证,得到了条带清晰、亮度适中、稳定可靠的电泳图.

摘要：用L16(45)正交实验设计研究模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq酶和引物5个因素的浓度对scot扩增迁移率重现率的影响。结果表明,在20μL反应体系中,2.5ng/μL DNA、1.00mmol/L Mg2+、1.20U Taq酶、0.40mmol/L dNTPs和0.30μmol/L浓度的引物最为稳定,重现率达到100%。利用最优反应体系从50条引物中筛选出13条扩增效果好的引物,将它们分别扩增34个苜蓿品种,共检测到103个scot标记,其中92个位点具有多态性。聚类分析表明,从安徽和江苏两地收集的野生南苜蓿和栽培苜蓿的遗传距离最远,单独聚为一类;其余32个品种苜蓿在相似系数0.757附近分为3个亚群,秋眠型苜蓿品种主要分布在第Ⅱ亚群中,半秋眠型在3个亚群中都有分布,而非秋眠型苜蓿分布在第一和第二亚群中,表明scot标记的聚类结果在一定程度上能够反映苜蓿的秋眠型,但并不完全一致。