摘要：为获得沙棘scot-pcr最佳反应体系并筛选出适用引物,本研究采用正交试验设计与单因素试验设计的方法对其反应体系进行优化,并在此基础上对设计的80条引物进行筛选。试验结果表明:沙棘scot-pcr最佳反应体系(20μL)为:2×Taq pcr预混试剂Ⅱ用量9.8μL,模板DNA用量25 ng,引物浓度0.9μmol/L;从设计的80条scot引物中筛选出24条扩增条带清晰、多态性较高的引物。本研究结果可为沙棘遗传多样性、遗传图谱构建、品种指纹图谱的构建等研究提供相关依据。

摘要：以玫瑰为试材,采用L16(45)正交设计和单因素试验2种方法,研究模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物和Taq酶5个因素对玫瑰scot-pcr反应体系的影响,建立最优化的反应体系并筛选合适引物。结果表明:模板DNA浓度为1.50ng/μL,Mg2+浓度为2.00mmol/L,dNTPs浓度为0.35mmol/L,引物浓度为0.70μmol/L,Taq酶用量为0.50U时,可建立玫瑰scot-pcr最佳反应体系,并筛选出20条扩增条带清晰、多态性丰富的scot引物。反应体系的优化及引物的筛选,为日后利用scot分子标记技术对玫瑰进行相关研究提供理论依据和技术支持。

摘要：为获得油棕scot-pcr反应的最佳反应体系以及筛选适用于该体系的scot引物,本研究首先通过利用L16(45)正交设计试验和单因素实验2种方法,对反应体系中的各因子进行优化,并在此基础上确定最优退火温度和循环数。结果表明,各因子对scot-pcr扩增影响大小依次为:dNTPs浓度>Mg^(2+)浓度>DNA模板量>Taq DNA聚合酶量>引物浓度;最佳反应体系(25μL)为:DNA模板量为120 ng,dNTPs浓度为0.2 mmol/L,Mg^(2+)浓度为1.5 mmol/L,引物浓度为0.6μmol/L,Taq DNA聚合酶量为2.0 U,其余用灭菌ddH_(2)O补足至25μL。最优扩增程序为:95℃预变性3 min;95℃变性30 s,55℃退火复性30 s,72℃延伸1 min,30个循环;最终72℃延伸5 min,保存于4℃恒温冰箱中。此外,利用优化体系从36条scot引物中筛选出30条可从油棕中扩增条带清晰的引物。使用scot-2等3条引物对30份油棕材料进行扩增,扩增产物均具有良好的多态性、可靠性和稳定性。本研究结果为油棕种质资源鉴定、遗传多样性分析以及品种遗传图谱构建等提供理论依据。

摘要：以温郁金为试材,运用L25(56)正交设计在5个水平上对影响温郁金scot-pcr反应的模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶和引物5个因素进行优化试验,对pcr结果进行极差分析。建立并优化温郁金的目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(scot-pcr)体系,以期为温郁金的遗传多样性分析及分子鉴定等研究提供技术支持。结果表明:建立了温郁金scot-pcr的最佳反应体系(20μL):引物0.8μmol/L,dNTPs 0.4mmol/L,Mg2+1.5mmol/L,Taq酶0.5U,模板DNA 40ng,且确定各因素对温郁金scot-pcr反应效果的影响大小依次为:dNTPs>Taq酶>引物>Mg2+>模板DNA,其中dNTPs对体系影响最大。优化的温郁金scot-pcr反应体系在多个温郁金品种遗传多样性研究中得到了验证,结果表现出良好的稳定性、重复性和多态性丰富等特点,可用于今后温郁金品种遗传多样性分析、系统发育分析、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究。

摘要：采用L_(25)(5~6)正交试验设计,对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(scot-pcr)的5个因素(Taq酶用量、Mg^(2+)浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了籽用西瓜scot-pcr反应体系:Mg^(2+)2.5mmol·L^(-1)、dNTPs 0.15mmol·L^(-1)、Taq酶1.5U、引物0.5μmol·L^(-1)、模板DNA 20ng,总体积20μL。比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg^(2+)浓度的影响最大,Taq酶用量的影响最小。应用22个籽用西瓜品种验证该体系稳定可靠,并从41个scot引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的22个引物,并逐一筛选出最适退火温度。该反应体系的建立为今后利用scot标记技术对籽用西瓜种质遗传多样性评价、指纹图谱构建、种质鉴定、分子标记辅助选择育种等研究提供了新的技术手段。

摘要：为建立浙江雪胆scot-pcr的最佳反应体系,本研究采用正交实验对dNTPs、引物、模板DNA及Taq聚合酶等的浓度进行筛选,并对采自景宁畲族自治县的材料进行验证。结果表明,pcr体系中各因素用量对多态性结果的影响大小依次是引物>dNTPs=Taq酶>模板DNA,最佳反应体系(20μL)为0.7μL dNTPs(10 mmol/L),0.3μL引物(20μmol/L),0.4μL Taq酶(2 U/μL),1.2μL DNA模板(20 ng/μL),2μL 10×缓冲液(含20 mmol/L Mg^(2+)),dd H_(2)O 15.4μL;筛选出11条稳定性好、多态性高和重复性好的引物,同时优化了它们的最佳退火温度;对10份种质资源进行验证,结果表明该体系扩增的结果稳定、扩增条带清晰。浙江雪胆scot-pcr体系的建立和优化,为后续开展遗传多样性研究、资源保护和分子育种提供了依据。

摘要：【目的】优化葛根scot-pcr反应体系,筛选适用于葛根的scot引物,为利用scot分子标记进行葛根种质资源鉴定、遗传多样性分析及分子标记辅助育种提供技术支持。【方法】采用正交设计对scot-pcr反应体系中的DNA模板量、dNTPs浓度、Mg^(2+)浓度、Taq DNA聚合酶量和引物浓度5个因素进行优化,利用最佳scot-pcr反应体系筛选出适用于葛根的scot引物,并对该体系进行验证。【结果】最佳葛根scot-pcr反应体系20.00μL:DNA模板50.00 ng,dNTPs 0.25 mmol/L,Mg^(2+)1.50 mmol/L,引物0.80μmol/L,Taq DNA聚合酶0.50 U。利用该体系从36条scot引物中筛选出35条可从葛根中扩增出清晰条带的引物。使用3条引物对18个葛根材料进行pcr扩增,pcr产物表现出良好的重复性、稳定性和丰富的多态性。【结论】建立的最佳葛根scot-pcr反应体系和筛选获得的35条scot引物可适用于葛根种质资种鉴定、遗传多样性分析、相关分子标记开发等研究。

摘要：为利用分子标记辅助育种技术更好地保护高粱的种质资源,本试验构建了高粱scot-pcr的最佳反应体系。试验采用单因素实验设计的方法对影响高粱scot-pcr反应体系的5个因素,即dNTP用量、DNA的用量、Mg2+浓度、引物用量、Taq DNA聚合酶浓度分别进行梯度设计优化分析,并对得到的最佳体系进行验证。综合单因素试验结果,明确在高粱scot-pcr 25μL反应体系中,最佳反应体系为:引物2.0μL,DNA 1.25μL,dNTP 1.0μL,Taq DNA聚合酶0.2μL,Mg2+2.0μL。本试验研究结果可为高粱的遗传多样性研究提供良好研究基础,并为高粱种质保护、育种提供帮助。

摘要：目的：对影响广西产拳卷地钱scotpcr反应的各因素进行优化，建立稳定的反应体系。方法：采用改进的CTAB法提取拳卷地钱基因组DNA；以DNA浓度、Taq聚合酶、Mg2＋、dNTP、引物浓度的5个主要因素进行五因素四水平的正交设计，对拳卷地钱scotpcr反应体系进行优化。结果：DNA条带整齐，无RNA污染、无降解、无弥散的荧光出现、加样孔清晰。紫外检测结果，0D260／280在1．714-2．199之间，拳卷地钱最佳反应体系（50μL）为：DNA模板30ng、MG2＋2mmol／L、dNTP0．2mmol／L、引物0．4μmol／L、TaqDNA聚合酶0．5U。结论：建立并优化了拳卷地钱scotpcr反应体系，为拳卷地钱品种鉴定、遗传多样性评价及亲缘关系分析提供实验数据，为药材资源开发利用提供参考依据。

摘要：本试验通过单因子试验和正交试验的设计对‘红桃K’彩叶芋的scot-pcr反应体系进行研究及优化。研究结果表明,彩叶芋scot最佳反应体系为(20μL):引物浓度0.7μmol/L,d NTPs(10 mmol/L)浓度0.5 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.25 U,DNA模板80 ng,Mg2+浓度1.5 mmol/L。pcr扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性45 s,50.4℃条件下退火45 s,72℃延伸90 s,35个循环后,72℃再延伸7 min,最后16℃保存。此外,利用市场上观赏价值较高的9个彩叶芋品种为材料,对确立的‘红桃K’彩叶芋scot-pcr扩增体系进行再验证。结果表明,扩增条带清晰,重复后稳定性高,说明该反应体系为鉴定彩叶芋多样性合适的scot分子标记体系,同时为后期彩叶芋遗传多样性、分子辅助育种及遗传图谱的建立提供了依据。