摘要：以牡丹基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(scot-pcr)的五因素(Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了优化的牡丹scot-pcr反应体系:Mg2+2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.60μmol/L、Taq DNA聚合酶0.50 U、模板DNA 1.00 ng/μL,1×pcr-Buffer,总体积20.00μL。比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg2+浓度的影响最大,DNA模板用量的影响最小。运用牡丹17个品种验证了该体系稳定可靠,并从36个scot引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的24个引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为今后利用scot标记技术对牡丹进行相关研究提供了科学依据。

摘要：为了获得适用于节瓜scot-pcr反应的反应体系以及适用于该体系的scot引物,首先利用正交实验的方法对节瓜scot-pcr反应体系的三因素(模板,2×san Taq pcr mix预混液,引物)的工作浓度进行优化。然后利用优化的节瓜scot-pcr反应体系对36条scot引物进行筛选,首次筛选到应用于节瓜中的scot引物,并对部分引物的退火温度进行优化。通过分析,确定了节瓜scot-pcr反应体系是DNA模板(25 ng/μL)2.5μL、2×San Taq pcr mix预混液11μL、引物(10μmol/L)2μL,筛选到了14条适合在节瓜的ISSR-pcr反应中应用的引物以及得到了它们的最适退火温度。与此同时,经验证该体系在节瓜应用具有良好的适用性、可靠性和稳定性。