摘要：目的应用RNA干扰技术构建shp-2基因重组慢病毒载体,研究shp-2shRNA联合苦参碱对宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响。方法靶向构建shp-2的shRNA序列慢病毒载体,将其转染至人宫颈癌Hela细胞以沉默shp-2基因,用Real-time PCR(RT-PCR)测定Hela细胞shp-2 mRNA,应用Western blot法测定shp-2蛋白表达,CCK8法测定shp-2基因沉默联合苦参碱对Hela细胞增殖的影响。结果设计并成功构建3组shp-2基因的干扰序列(shp-2 shRNA1、shp-2 shRNA2和shp-2 shRNA3)以及对照序列(NS),RT-PCR检测结果表明shp-2 shRNA2慢病毒载体干扰效率最佳。筛选稳定细胞后荧光显微镜观察感染效率较高,Western blot结果显示细胞中shp-2蛋白表达明显被抑制。CCK8提示细胞的生长增殖能力明显受限,且随着时间延长,联合组(shp-2 shRNA2+苦参碱)增殖最慢,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建出shp-2基因的shRNA慢病毒干扰系统,shp-2基因沉默联合苦参碱可影响宫颈癌细胞增殖。

摘要：shp-2蛋白是一种含有两个SH2结构域的磷酸酶。shp-2的N端SH2结构域是细胞因子或病毒因子激活该蛋白的分子内靶点。对shp2基因进行信息学分析,设计引物通过PCR克隆出人shp-2蛋白N端SH2结构域(NSH2)的DNA序列。重组到原核表达载体pGEX-2T中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功高效率表达了可溶性NSH2蛋白。对蛋白进行15N同位素标记和纯化,并浓缩获得达到进行核磁滴定法结构研究的蛋白样品。