摘要：目的:观察miR-214对人卵巢癌细胞株skov-3中Sema4D表达水平的影响,探讨miR-214对Sema4D的调控作用。方法:运用RT-PCR法检测卵巢癌细胞株skov-3中miR-214及Sema4D mRNA的表达情况,采用West Blot法检测Sema4D蛋白的表达情况;设计并合成miR-214模拟物和miR-214抑制剂,二者空白对照序列(模拟物对照、抑制剂对照),分别以脂质体liposome 2000包裹后转染人卵巢癌细胞株skov-3,并设立空转liposome 2000(lipo 2000)为对照。转染后24 h检测Sema4D mRNA及蛋白的表达变化。实验数据采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。结果:skov-3细胞株miR-214及Sema4D表达阳性;转染后24 h模拟物组、模拟物对照组、抑制剂组、抑制剂对照组、脂质体组Sema4D mRNA相对表达水平分别为0.20±0.30、0.39±0.16、1.02±0.36、0.53±0.23和0.28±0.13;蛋白相对表达水平分别为0.10±0.15、0.30±0.15、1.15±0.57、0.51±0.12和0.52±0.27;模拟物组Sema4D mRNA及蛋白相对表达水平均明显低于模拟物对照组及脂质体组(P<0.05);抑制剂组Sema4D mRNA及蛋白相对表达水平均明显高于抑制剂对照组及脂质体组(P<0.05)。miR-214负向调控Sema4D。结论:人卵巢癌细胞株skov-3中,Sema4D是miR-214的靶基因,miR-214可通过下调Sema4D mRNA和蛋白表达水平从而发挥该靶基因转录和翻译水平的负性调控作用。

摘要：目的优化蟾酥中脂溶性成分华蟾酥毒基及酯蟾毒配基的提取工艺,并探讨蟾酥提取物对人宫颈癌HeLa细胞和卵巢癌skov-3细胞的增殖及细胞周期的影响。方法采用U5(54)均匀设计,考察酒精浓度、酒精用量、提取时间等因素对指标性成分提取的影响;MTT法检测蟾酥提取物对HeLa与skov-3细胞增殖的影响;流式细胞技术检测细胞周期变化;倒置显微镜下观察HeLa和skov-3细胞形态变化。结果以100倍量95%酒精加热回流提取2次,每次2.5 h,两种指标性成分转移率最大,为(117.20±3.52)%;蟾酥提取物呈时间和剂量依赖性地抑制HeLa和skov-3细胞增殖;随着蟾酥提取物剂量的增加,HeLa细胞出现S期和G2/M期阻滞,skov-3细胞出现G0/G1期阻滞,两种细胞均出现空泡样变性。结论均匀设计法优选蟾酥有效成分的提取工艺合理可行;蟾酥提取物可显著抑制HeLa和skov-3细胞的增殖,使细胞出现空泡样变性,并阻滞细胞周期。