摘要：目的：探讨设计含有T7-启动子的Oligo-DNA，继而合成T7发夹RNA，并应用T7-shRNAs对卵巢癌skov3细胞株的卵巢癌C-erbB2基因进行RNAi。方法：自行设计并应用体外转录法合成、筛选出3条T7-shRNAs，脂质体转染卵巢癌skov3细胞株，分为非转染组、无关RNA组、shRNA（a、b、c）组，免疫细胞、RT-PCR及CCK-8观测干涉结果。结果：体外转录结果，合成后电泳检测shRNA（a、b、c）纯度较高，符合实验标准；转染后免疫细胞爬片结果，非转染组、无关RNA组和shRNAc链24、48、72h可见细胞生长正常，与时相无关，着色为深棕色，无抑制效果；shRNAa链24h可见有一定抑制效果，但48h即开始恢复生长，72h已恢复正常；shRNA b链24、48、72h可见有明显抑制效果，以24-48h最为明显，至72h仍维持相当抑制率；在核酸水平上半定量的RT-PCR结果与上述结果相符合；CCK-8动态观测，经shRNA干涉后不同时间内的抑制曲线显示，shRNAb链的抑制作用最明显，而shRNAa链和shRNAc链的抑制作用不明显（P〈0.01），但shRNAa链抑制作用强于shRNAc链（P〈0.01），从整个时间段来看，shRNAb在48h的抑制作用最强。结论：研究证实应用发夹RNA对肿瘤细胞可以取得明显干涉效果，发现shRNAb对C-erbB2基因干涉具有明显抑制作用，进一步完善RNA干涉实验来抑制肿瘤细胞生长是存在可能的。

摘要：目的:通过慢病毒介导的EZH2-shRNA干扰载体,沉默人卵巢癌skov3细胞中果蝇zeste基因的人类同源物(EZH2)的表达,探讨靶基因EZH2对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:设计含EZH2基因序列的shRNA慢病毒干扰载体,转染人卵巢癌skov3细胞株;利用CCK-8比色法检测EZH2基因沉默后对skov3细胞增殖的影响;利用RT-PCR、Western blot分别检测EZH2、PCNA mRNA及蛋白的表达情况。结果:EZH2-shRNA载体感染skov3细胞后,可显著抑制skov3细胞生长(P<0.05),并下调EZH2、PCNA mRNA和蛋白的表达(P均<0.05),而在空白对照组和空载体转染组中,无抑制作用。结论:沉默EZH2基因可抑制人卵巢癌skov3细胞增殖,可能是一种新的基因治疗方法。

摘要：目的 运用构建的小发夹状RNA重组质粒pshRNA／H—ras，研究其对卵巢癌SK—OV3细胞株内源H-ras基因的抑制作用。方法 应用基因克隆技术，设计含21bp H—ras基因编码序列片段及中间以4～5个bp间隔的反向重复序列，克隆至转录载体pTZU6＋1上并行序列分析。转染重组质粒pshRNA／H—ras至skov3细胞中，分别采用RT-PCR、Western blot检测细胞内H-rasmRNA和蛋白表达的变化。结果 成功构建发夹状RNA载体，经DNA序列鉴定为正确的目的序列。RT-PCR和Western blot结果表明，重组质粒pshRNA／H—ras1和pshRNA／H—ras2均能在基因转录水平和蛋白表达水平上明显抑制skov3细胞内源H—ras蛋白的表达，抑制率达67％以上。结论 重组质粒pshRNA／H—ras可显著抑制skov3细胞内源H-ras基因mRNA的转录和相应蛋白质的表达，为进一步研究H-ras基因在卵巢癌细胞异常增殖中的作用打下基础。

摘要：目的:利用RNA干扰技术抑制卵巢癌细胞株skov3细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达及细胞的体外增殖活性。方法:根据EGFR mRNA序列设计特异性siRNA插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入线性化质粒pSilencerTM2.1-U6neo,以HifectinII真核转染试剂将重组质粒转染至skov3细胞中,用RT-PCR和免疫细胞化学方法分别鉴定转染前后EGFR基因在mRNA和蛋白水平表达的变化;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定转染前后细胞增殖活性的改变。结果:DNA测序证实EGFR siRNA表达载体的siRNA插入序列完全正确,该表达载体可特异性抑制EGFR基因的表达;转染后细胞的增殖受到抑制,其中第5天的抑制率达到30%(P<0.05)。结论:靶向EGFR的序列特异性siRNA真核表达载体可有效抑制skov3细胞中EGFR基因的表达和细胞的增殖。

摘要：目的：探讨应用RNA干扰技术沉默Aurora-A基因表达,研究其对人卵巢癌skov3细胞增殖的抑制作用。方法：设计合成两对特异性针对Aurora-A基因的Oligo siRNA,转染至skov3细胞中,采用RT-PCR和Western blot检测Aurora- A mRNA和蛋白表达情况,同时利用MTT试验和流式细胞仪观察转染后细胞增殖抑制和凋亡情况。结果：转染Oligo siRNA后,skov3细胞Aurora-A mRNA表达受抑制(P＜0．01),蛋白表达水平降低；细胞增殖的抑制率和细胞凋亡率明显增高(P＜0．05,P＜0．01)。结论：体外合成的特异性针对Aurora-A基因的Oligo siRNA对卵巢癌细胞株skov3中Aurora-A基因表达和细胞增殖均有明显抑制作用,为进一步研究Aurora-a基因的功能提供了实验基础。

摘要：目的:通过构建人卵巢癌skov3 Id1特异性siRNA慢病毒载体及其裸鼠移植瘤模型,观察沉默分化抑制因子(inhibitor of differentiation-1,Id1)表达对卵巢癌skov3生长的影响。方法:根据Id1基因序列设计并合成的siRNA片段转染skov3细胞,将转染细胞分为四组:cell+lv-shRNA-Id1(实验组)、cell+lv-shRNA-NC(质粒对照组)、cell+lv-control(空病毒对照组)、cell(空白对照组),筛选出稳定转染的skov3细胞克隆,48小时后检测细胞生长活性。将40只裸鼠随机分为四组,分别接种上述转染成功的细胞,30天后称取瘤体重量,计算抑瘤率;然后通过Western blotting法检测移植瘤中Id1蛋白的表达。结果:在体外试验中,实验组的细胞生长活性显著低于空白对照组,具有统计学意义(P0.05);体内实验显示,实验组平均瘤重均低于其他三对照组,差异具有统计学意义(P0.05);实验组、质粒对照组、空病毒组抑瘤率分别为45.98%、4.84%、4.50%;Western blotting结果显示,实验组中Id1表达较对照组明显下调(P<0.05)。结论:沉默Id1基因能抑制卵巢癌细胞的生长,有望成为卵巢癌治疗新靶点。

摘要：目的探讨温热联合顺铂(DDP)对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株skov3的毒性作用及量效关系。方法以体外培养的人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株skov3为研究对象,采用配伍设计的方法,恒温水浴加热,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同加热温度、加热时间、药物浓度对skov3的细胞毒作用的影响。结果(1)加热时间设为30min,不同浓度DDP的细胞毒指数(CI)值均随加热温度的升高而逐渐增高,40℃以上各不同浓度DDP的CI值与37℃时比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论增高加热温度或延长加热时间均可以显著提高DDP对skov3的细胞毒作用。