摘要：Surv iv in是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的一个成员,具有强大的抗细胞凋亡功能,在几乎所有肿瘤组织中特异性表达,而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达。本研究针对Surv iv in mRNA序列设计了反义寡核甘酸,RT-PCR检测表明,该序列反义寡核苷酸可明显降低细胞中surv iv in基因的mRNA含量;W estern印迹显示Surv iv in蛋白水平也被降低。M TT比色实验法检测结果说明人Surv iv in反义寡核苷酸抑制SMM C-7721细胞增殖,抑制率为43%,远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。反义寡核苷酸还显著增强SMM C-7721细胞对于抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性,TUNEL法检测结果显示,在较低高三尖杉酯碱浓度下,反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。本研究结果提示,surv iv in表达的靶向抑制有望应用于肿瘤的辅助治疗之中。

摘要：目的研究冬虫夏草多糖（Cordyceps sinensis Sacc polysaccharide,CSP）对人肝癌smmc-7721细胞增殖及凋亡作用.方法将不同浓度的CSP分别与人肝癌细胞smmc-7721共同培养24、48和72h后,采用中性红染色法测定吸光度,评定CSP对肝癌细胞增殖的作用;流式细胞术测定对肝癌细胞凋亡的影响.结果虫草多糖对smmc-7721细胞增殖有明显的抑制作用（P〈0.05,P〈0.01）,24、48和72h的半数抑制浓度（IC50）分别为（1.13±0.05）、（0.68±0.02）、（0.44±0.01）g·L^-1,药物效应与给药时间一剂量呈依赖关系;流式细胞仪检测结果表明,CSP1.5g·L^-1作用24h后,对肝癌smmc-7721晚期细胞凋亡率10.15%（P〈0.05）,凋亡率随药物浓度的增加而上升,对早期细胞凋亡未见明显影响.结论CSP对肝癌smmc-7721细胞增殖有明显的抑制作用,诱导晚期细胞凋亡,该效应与剂量一时间呈依赖性.

摘要：目的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的变化可能损害氧的利用,导致细胞的氧化和减少能量的产生,从而引起肿瘤细胞的凋亡。文中观察smmc-7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后,线粒体DNA部分D-loop区碱基的损伤规律及特定的断裂敏感点。方法根据人线粒体DNA非编码区的基因序列设计相应的引物序列,再通过接头介导PCR(LM-PCR)及基因扫描来检测其断裂程度、位点及规律。结果在接受不同剂量γ射线照射后,通过ligation-media-ted PCR(LM-PCR)和基因扫描检测,发现各剂量都有相同大小的片段,即存在相同的断裂位点,且这些位点并非随机分布,位点的损伤频率也随着剂量的增加而呈现递增趋势。同时,随着剂量的增加还出现了新的断裂位点,且在一定范围内出现了双链断裂。结论线粒体DNAD-loop区在60Co照射后,产生的一系列断裂敏感位点和双链断裂及本身特有的突变位点,可能对smmc-7721细胞辐射后的细胞凋亡起到重要作用,推测mtDNA很有可能是电离辐射易感的靶点,mtDNA的变化能够作为肿瘤细胞辐照前后损伤的一个重要指标。

摘要：目的通过实时定量PCR(Real-Time PCR)检测基因表达的mRNA,建立一种直接观察小干扰RNA(SiRNA)抑制目的基因表达的方法。方法化学设计合成对应于中期因子(midkine,MK)基因表达mRNA的SiRNA,经脂质体转染肝癌细胞株smmc-7721,一定时间后,提取总RNA,逆转录cDNA,然后用实时定量PCR方法,以3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase;GAPDH)为内参照定量MK的表达,比较不同组中MK基因mRNA的量。结果3种SiRNA处理的smmc-7721细胞中MK基因的表达mRNA明显降低(P<0.01)。结论实时定量PCR方法直接、简便、精确地反映了SiRNA对目的基因表达的抑制作用。

摘要：目的探讨细胞间黏附分子-1（ICAM-1，CD54）基因的短发夹结构RNA（shRNA）表达载体pGenesil-1／CD54对smmc-7721肝癌细胞株CD54表达的抑制作用。方法设计CD54基因shRNA片段和阴性对照shRNA片段，构建pGenesil-1／CD54和阴性对照表达载体，载体在eoli菌扩增、鉴定后，转入smmc-7721细胞。应用免疫组织化学技术检测肝癌细胞中CD54基因的表达。结果阳性和阴性表达载体酶切，电泳有65bp和4．9kb条带，载体插入片段测序，与设计序列相同，表达载体构建正确。免疫组织化学检测表明，阴性对照表达载体转染smmc-7721细胞，细胞膜和细胞质着黄色和棕色，pGenesil-1／CD54转染smmc-7721细胞，不着色或着淡黄色。结论CD54的shRNA能特异性地抑制CD54在肝癌细胞smmc-7721中的表达。

摘要：目的:筛选与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)预后相关的增强子RNA(enhancer RNA,eRNA)及其对应的靶基因,并探究其调控作用及功能。方法:通过UCSC数据库下载HCC的转录本数据和临床病例数据,提取eRNA及其预测的相应靶基因表达矩阵,用Kaplan-Meier和Spearman相关性分析方法筛选HCC预后相关的eRNA和靶基因,并采用最小化绝对收缩和选择算子回归分析及多因素Cox多元回归分析构建HCC预后风险评分模型。设计合成针对筛选所获关键eRNA AP003469.2的小干扰RNA并转染肝癌smmc-7721细胞,采用RT-PCR方法验证敲减效率,qPCR法检测AP003469.2靶基因YWHAZ的表达水平,CCK-8法检测转染后smmc-7721细胞的增殖情况。结果:筛选获得4个与预后相关基因,包括两个eRNA(AP003469.2和SPRY4-AS1)和两个靶基因(PPARGC1A和SLC2A1)(P<0.05),其中PPARGC1A高表达提示预后较好,AP003469.2、SPRY4-AS1和SLC2A1基因高表达则提示预后较差。基于4个基因构建的预后风险评分模型,第1、3和5年的AUC分别为0.730、0.699和0.679,提示模型具备良好的预测效能。在敲减AP003469.2后,smmc-7721细胞中YWHAZ的表达无明显改变,且对细胞的增殖无影响。结论:基于生物信息学分析共筛选出4个关键基因,其中eRNA AP003469.2是HCC预后预测效能较高的标志物,其无促癌功能且对YWHAZ基因无调控作用。

摘要：目的:构建人谷胱甘肽-S-转移酶Z1(glutathione S-transferase zeta 1,GSTZ1)重组腺病毒,并初步研究GSTZ1调控粘附连接信号通路(adhesion junction pathway)靶基因SMAD3、IGF1R等影响肝癌细胞的迁移能力。方法:PCR扩增GSTZ1 cDNA序列并克隆到腺病毒载体pAd Track-TO4,构建重组腺病毒质粒p Ad Track-GSTZ1,将重组质粒用Lipofectamine 2000转染至HEK293细胞中,包装、扩增成高滴度重组腺病毒AdGSTZ1。首先,将smmc-7721细胞设为3组:Mock组、AdGFP组和AdGSTZ1组,Mock组为空白对照组,AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组,AdGSTZ1组为感染腺病毒AdGSTZ1的实验组。然后,通过Transwell实验和MTS实验观察其对肝癌细胞迁移增殖能力的影响,进一步经qRT-PCR及Western blot技术研究GSTZ1通过调控粘附连接信号通路关键分子影响肝癌细胞的迁移。结果:成功构建了高滴度重组腺病毒AdGSTZ1,经Western blot鉴定GSTZ1在smmc-7721细胞中的表达。Transwell实验结果表明,AdGSTZ1组与Mock组及AdGFP组相比,能够明显抑制人肝癌细胞的迁移能力;与Mock组相比,抑制率为(68.10±1.63)%(P=0.000),与AdGFP组相比,抑制率为(50.70±0.99)%(P=0.000)。MTS实验结果表明,AdGSTZ1组在72 h和96 h的吸光度值分别为(1.13±0.08)和(1.28±0.07),AdGFP组72 h和96 h的吸光度值分别为(1.28±0.03)和(1.45±0.03),AdGSTZ1组在96 h的吸光度值与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。另外q RT-PCR及Western blot结果显示,与Mock组和AdGFP组相比,AdGSTZ1感染细胞内粘附连接信号通路中靶基因SMAD3、IGF1R等的表达明显降低。q RT-PCR结果显示,AdGSTZ1组与AdGFP组相比,TGFBR1相对表达量为(0.58±0.13)(t=4.609,P=0.010),SMAD3相对表达量为(0.51±0.08)(t=8.030,P=0.000),ERBB2相对表达量为(0.46±0.09)(t=9.384,P=0.000),IGF1R相对表达量为(0.45±0.02)(t=14.480,P=0.000),FARP2相对表达量为(0.37±0.13)(t=7.082,P=0.028)。Western blot表明,SMAD3组中,AdGFP组的蛋白相对表达量为(0.96±0.18),AdGSTZ1实验组的蛋白相对表达量(0.39±0.01)(P=0.001)。IGF1R组中,AdGFP组的蛋白相对表达量为(0.97±0.05),AdGSTZ1实验组的蛋白相对表达量(0.44±0.02)(P=0.000)。结论:GSTZ1通过调控粘附连接信号通路相关靶基因的表达抑制肝癌细胞的迁移。

摘要：目的：通过RNA干扰技术沉默内源性抑癌基因Arid2（si Arid2）的表达,观察其对肝癌细胞生长及细胞周期的影响。方法：设计3对特异性沉默Arid2基因的shRNA序列,分别克隆到腺病毒骨架载体上形成重组腺病毒质粒。将质粒转染到HEK293细胞中,包装和扩增形成完整高滴度的重组腺病毒Adsi Arid2-1-3。用构建好的腺病毒感染人肝癌smmc-7721细胞,Western blotting方法检测Arid2蛋白的表达,筛选干扰效果最佳的重组腺病毒。MTS技术和流式细胞术观察干扰Arid2基因后肝癌细胞增殖和细胞周期的变化。结果：成功构建了高滴度的重组腺病毒Adsi Arid2-1-3。经Western blotting鉴定,Adsi Arid2-3为抑制效果最佳的重组腺病毒。MTS结果显示,Adsi Arid2组细胞在72 h、96 h的吸光度值与空细胞组和Adsicontrol组相比增高,细胞增殖速率明显加快。流式细胞术检测结果显示,Adsi Arid2组处于G1期、S期的细胞百分比与空细胞组和Adsicontrol组相比,G1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增多。结论：成功构建干扰Arid2的重组质粒及重组腺病毒。沉默Arid2可以促进肝癌细胞的增殖,促进其由G1期向S期的转换。

摘要：目的:评价新设计合成的杨梅素衍生物S2-1-5对人肝癌smmc-7721细胞的抗肿瘤活性,以期为杨梅素衍生物的结构优化和抗肝癌药的进一步研发提供依据。方法:以杨梅素为母体,通过化学反应合成S2-1-5,并用核磁共振(NMR)和高分辨质谱(HRMS)进行结构和定量分析,再验证其抗肿瘤活性:将不同浓度的S2-1-5和阳性对照药吉西他滨作用于smmc-7721细胞,DMSO作为阴性对照组,通过MTT实验和形态学观察检测S2-1-5对smmc-7721细胞的增殖抑制作用,划痕实验检测smmc-7721细胞迁移能力,流式细胞术检测smmc-7721细胞周期和细胞凋亡。结果:NMR和HRMS确定了2-氟苄基4-((3-((5,7-二甲氧基-4-氧代-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4H-色烯-3-基)氧基)丙基)(甲基)氨基)哌啶-1-二硫代羧酸(S2-1-5)的分子结构,其化学式为C_(37)H_(43)FN_(2)O_(8)S_(2)。S2-1-5的抗肿瘤活性实验表明:与对照组相比,不同浓度下,S2-1-5的抑制活性更高,差异均具有统计学意义(P<0.05);S2-1-5能抑制smmc-7721细胞迁移(P<0.05);S2-1-5使smmc-7721细胞的细胞周期阻滞在S期(P<0.05);S2-1-5能诱导smmc-7721细胞凋亡(P<0.01)。结论:成功合成S2-1-5,其能通过抑制smmc-7721细胞增殖和迁移,诱导细胞周期阻滞和凋亡发挥其体外抗肿瘤作用。

摘要：进由 nanomagnets 的热的电磁的精力的变换有潜力是为由过高热和基于过高热的药版本的癌症治疗的一种强大的、非侵略的技术，当时温度可控制性并且加热指向是对开发如此的磁性的引入的过高热的应用程序的挑战。这研究被设计用交流电(交流) 和一个静态的磁场的联合控制过高热位置和区域。展出了优秀过高热性质的 MnZn 铁酸盐(MZF ) nanoparticles 首先作为一个引入的加热调停人被准备并且描绘。我们造了简单地使用一双永久磁铁的模型静电干扰磁场并且由大小和数字模拟学习了静态的磁场分布。过高热性质上的横向的静态的磁场的影响然后在 vitro 在 MZF 磁性的液体，胶化幽灵和 smmc-7721 房间上被调查。结果证明一个静态的磁场能在一个交流磁场禁止 MZF nanoparticles 的温度上升。但是在不平的静电干扰，磁场与面对面排斥杆由磁铁对形成了，加热区域能在一个中央低静态的领域里被限制；同时，过高热的副作用能由一个包围高静态的领域被减少。作为结果，我们能放过高热区域，保护非治疗学的区域，并且减少就由使用交流和静态的地的设计得好的联合的副作用。