摘要：目的:研究sox2表达对人喉癌上皮细胞Hep-2化疗敏感性的影响。方法:设计合成RNAi-sox2序列,瞬时转染Hep-2细胞,Western blot法筛选沉默效率最好的RNAi-sox2构建pGCsi-H1-sox2质粒,并构建其对照质粒pGCsi-H1-NC,分别转染Hep-2细胞建立稳定沉默sox2表达细胞株psisox2-Hep-2及其对照细胞株psiNC-Hep-2。CCK-8法检测sox2表达沉默对Hep-2细胞对化疗药物敏感性的影响;Hoechst染色法检测sox2表达沉默对化疗药物诱导Hep-2细胞凋亡的影响;Western blot法检测sox2表达沉默对凋亡相关基因Survivin、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3表达的影响。结果:成功获取sox2表达沉默细胞株psisox2-Hep-2及其对照psiNC-Hep-2细胞株,与psiNC-Hep-2细胞相比,psisox2-Hep-2中sox2表达下降78%。sox2表达沉默后,psisox2-Hep-2细胞对5-FU和紫杉醇的敏感性均增强,psisox2-Hep-2细胞48h的IC50值分别下降到8.12μg/ml和5.16μg/ml;同时,psisox2-Hep-2细胞凋亡数增多;抗凋亡基因Survivin、Bcl-2表达下降明显,凋亡基因Bax、cleaved caspase-3表达显著上升。结论:RNAi沉默sox2表达将显著增强人喉癌上皮细胞Hep-2对5-FU和紫杉醇的敏感性。

摘要：【目的】构建pTAT-bsox2-9R融合表达载体,并对其进行原核表达研究,为利用TAT和多聚精氨酸(9R)的跨膜作用实现转录因子蛋白直接重编程牛体细胞提供科学资料。【方法】以GenBank上公布的牛sox2基因编码区序列为基础,设计并合成含酶切位点、跨膜转导肽TAT和9R的引物;利用PCR扩增方法获得包括sox2、TAT和9R的重组DNA序列,并将其克隆到空质粒pTAT-HA上,从而构建pTAT-HA-bsox2-9R重组表达载体;将经酶切鉴定和测序验证后的重组表达载体转化大肠杆菌,在不同IPTG浓度和诱导时间等条件下进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。【结果】成功获得bsox2-9R重组序列,成功构建重组质粒pTATbsox2-9R;pTAT-bsox2-9R在0.6mmo/L的IPTG于37℃诱导4h的条件下表达目的蛋白约36ku,经Western blot验证为目的蛋白。【结论】成功获得了pTAT-bsox2-9R融合蛋白,为多聚精氨酸蛋白转导域(PTD)介导的转录因子蛋白直接重编程黄牛体细胞以获得诱导多潜能干细胞的研究积累了原始资料。

摘要：目的阐明转录因子sox2在胃黏膜肠化生(intestinal metaplasia,IM)中的作用。方法 RT-PCR法检测人胃上皮细胞系GES-1,正常胃黏膜和肠黏膜活检组织中sox2、Cdx2和Muc2 mRNA表达。设计合成sox2 siRNAs并转染到GES-1细胞中使sox2表达下调。RT-PCR检测对照组和sox2干扰组肠上皮特异性基因Muc2和Cdx2 mRNA表达。结果 GES-1细胞、正常胃黏膜和肠黏膜活检组织中sox2、Cdx2和Muc2 mRNA表达不同。特异性小干扰RNA明显下调GES-1细胞中sox2 mRNA的表达。RT-PCR结果显示sox2干扰组的sox2 mRNA相对表达量(×10-3)低于对照组(70.7±6.9 vs 246.6±9.9,P=0.014),而Muc2 mRNA和Cdx2mRNA的相对表达量高于对照组(22.4±4.3 vs 0,P=0.012;646.2±204.2 vs 116.2±17.2,P=0.045)。结论 sox2在胃黏膜IM的发生、发展中起着重要作用。

摘要：背景:诱导性多潜能干细胞与肿瘤干细胞的发生过程极其相似,而且具有的干细胞特性极其接近人胚胎干细胞。因此,研究诱导性多潜能干细胞有利于人们进一步认识并了解人类发育以及肿瘤的发生过程。目的:掌握建立人诱导性多潜能干细胞系的技术,以便为特异性疾病细胞的重编程建立技术平台,从而利用重编程技术研究疾病的发病机制。方法:将含有Oct4、sox2、Klf-4和c-Myc 4个转录因子的反转录病毒感染人皮肤成纤维细胞(HS27细胞),在人胚胎干细胞培养条件下诱导产生人胚胎干细胞样的克隆。挑取并进一步扩增,通过克隆形态、碱性磷酸酶活性、免疫荧光检测是否有人胚胎干细胞标记物Oct4、sox2、c-Myc、Klf-4的表达,悬滴法检测HS27细胞来源的克隆形成畸胎瘤的能力和验证向3个胚层的分化能力。结果与结论:经病毒感染诱导产生的胚胎干细胞样克隆呈绿色荧光蛋白阴性,克隆在细胞形态方面与人胚胎干细胞克隆相似,进一步扩增经碱性磷酸酶检测克隆呈阳性,免疫荧光检测克隆表达Oct4、sox2、c-Myc、Klf-4,并且HS27细胞来源的克隆注入免疫缺陷小鼠体内可以形成畸胎瘤并经苏木精-伊红染色显示具有向三胚层分化能力。实验成功构建了人诱导性多潜能干细胞系,为下一步开展疾病细胞特异性重编程研究奠定了良好的实验基础。