摘要：背景:研究表明sox9参与软骨细胞凋亡,但在颈椎间盘软骨终板、纤维环及髓核中的表达及作用机制尚不清楚。目的:本文通过对人颈椎间盘软骨终板、纤维环及髓核中sox9表达的研究,阐明sox9在颈椎间盘软骨细胞凋亡中作用机制。设计、时间及地点:对比观察,于2006-11/2007-11在中国医科大学附属盛京医院中心实验室完成。材料:取住院行颈椎病手术所取出的新鲜椎间盘标本30例作为实验组,经病理证实为退变椎间盘;正常对照组标本30例取自颈椎外伤行椎管减压术患者,所取椎间盘组织经病理学证实为正常椎间盘组织,所有标本均为C4-5间盘。方法:将全部颈椎间盘在解剖显微镜下分出软骨终板、纤维环、髓核,并进行苏木精-伊红染色行形态学观察。主要观察指标:计算机显像系统图像分析sox9在每100个视野中强阳性、弱强阳及阴性表达所占比例;免疫组织化学技术检测sox9在各组中的表达。结果:①sox9在正常软骨终板、正常纤维环、正常髓核中阳性表达所占比例高于阴性表达;在异常软骨终板、异常纤维环、异常髓核中阳性表达所占比例低于阴性表达。②sox9在正常颈椎间盘的软骨终板、纤维环、髓核中的表达均高于实验组(P0.05)。结论:sox9基因参与了细胞凋亡所导致的椎间盘退变过程,随着退变发生在软骨终板内表达最低,提示椎间盘细胞凋亡可能始于软骨终板。

摘要：目的:构建小鼠S0X9基因干扰的慢病毒载体,体外转染小鼠骨髓间充质干细胞,观察小鼠sox9基因在小鼠间充质干细胞中的表达影响。方法:针对小鼠sox9基因序列,设计RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的双链DNAoligo连入酶切后的RNA干扰载体上,构建Lenti-sox9-siRNA-EGFP载体,鉴定扩增。利用sox9基因沉默载体体外转染小鼠骨髓间充质细胞,利用倒置荧光显微镜观察转染是否成功,并通过流式细胞仪测定转染效率。同时利用RT-PCR和Western Blot检测小鼠sox9基因的表达。结果:成功构建了Lenti-sox9-siRNA-EGFP,sox9基因沉默慢病毒载体,能高效转染小鼠骨髓间充质细胞。RT-PCR和Western Blot检测显示经sox9基因转染的小鼠骨髓间充质细胞基因表达沉默。结论:利用慢病毒结合RNA干扰技术敲减小鼠sox9基因成功地转染小鼠骨髓间充质干细胞,且sox9基因在小鼠骨髓间充质干细胞中发生了沉默,这为sox9修复软骨损伤的进一步研究奠定了基础。

摘要：通过Genome walking方法克隆得到了牙鲆(Paralichthys olivaceus)sox9的基因组全长序列,对其在成鱼各组织的差异表达进行了RT-PCR分析。结果显示:牙鲆sox9基因全长3 573 bp,包含3个外显子和2个内含子,编码的蛋白全长478 aa,含有高度保守的HMG结构域;sox9基因在性腺的表达具有两性差异,精巢中的表达明显强于卵巢中的表达,属1个性别相关基因,但其在肝脏、心脏、鳃、脑、眼和胃等多种组织中也有不同程度的表达。据此进一步分析和讨论等sox9基因在牙鲆性腺发育中的作用。

摘要：目的构建sox9启动子观察其与软骨相关基因sox9和Ⅱ型胶原蛋白基因的调控与影响。方法构建和鉴定sox9启动子,观察其在人体软骨肉瘤细胞中对sox9基因和Ⅱ型胶原蛋白基因COL2A1 mRNA表达的影响。结果测序结果与设计的sox9启动子转录模板序列完全相同,sox9启动子转染的人体软骨肉瘤细胞中sox9基因和Ⅱ型胶原蛋白基因COL2A1的mRNA表达增加。结论构建sox9启动子具有转录功能,可以稳定转染人体软骨肉瘤细胞,转染后可以增加sox9基因和Ⅱ型胶原蛋白基因COL2A1 mRNA的表达。

摘要：采用全长转录组文库结合三代高通量测序的方法得到远海梭子蟹sox9基因的全长序列,通过引物设计及PCR产物直接测序验证三代测序结果,最终准确地获得sox9基因序列。对sox9基因全长序列进行生物信息学及基因进化分析。结果表明该基因CDS基因序列全长1461bp,蛋白质的无规则卷曲、α-螺旋、β-折叠区域分别占58.64%、25.93%、0%。进化树分析结果表明,远海梭子蟹sox9与三疣梭子蟹的sox10基因同源性较高,其核酸序列和氨基酸序列的相似性分别为96.24%和98.77%。远海梭子蟹的sox9基因鉴定和蛋白质结构预测与功能分析,将为该物种遗传资源挖掘与利用分析奠定重要基础。

摘要：目的:应用慢病毒干扰sox9的表达,观察其对脑胶质瘤干细胞干性维持的影响。方法:设计2条针对sox9转录短发夹RNA(sh RNA)的DNA序列,构建慢病毒并感染胶质瘤细胞系U87、U251细胞,利用嘌呤霉素筛选稳转细胞。在转录水平及蛋白水平检测sox9的沉默效果,利用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)及免疫荧光染色检测相应干细胞相关标志分子sox2、Nestin的表达差异。比较诱导形成的胶质瘤干细胞成球能力(肿瘤干细胞成球的直径),同时利用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)及免疫荧光染色对干细胞相关标志物sox2、Nestin的表达水平进行比较。结果:sox9成功包装慢病毒并有效感染U87、U251细胞,实时荧光定量PCR检测其抑制率分别可降低83.74%和80.12%。并且在稳转细胞系水平相关干细胞标志分子表达含量有明显下降。在干细胞层面沉默sox9可以明显抑制胶质瘤细胞诱导成球的直径(P<0.01),同时免疫荧光显示肿瘤干细胞相关干性分子sox2、Nestin的表达水平较对照组明显降低。结论:慢病毒感染沉默sox9基因可以抑制胶质瘤干细胞干性的维持,为胶质瘤的生物治疗提供了重要的靶点。

摘要：目的利用小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒转染HTB-94软骨肉瘤细胞，观察其在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中对肿瘤细胞生长的影响。方法设计并合成高泳动家族性别决定基因9（sox9）siRNA，将其转染HTB-94肿瘤细胞，观察肿瘤细胞的sox9基因的mRNA和蛋白表达、生长曲线和细胞凋亡情况。结果sox9siRNA的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致，sox9基因的mRNA和蛋白表达降低，HTB-94肿瘤细胞的生长繁殖受到抑制，细胞凋亡增加。结论sox9siRNA表达质粒可以通过稳定转染HTB-94肿瘤细胞，抑制sox9基因的mRNA和蛋白的表达，抑制肿瘤细胞的生长繁殖，同时使肿瘤细胞凋亡。