摘要：根据srap引物设计规律设计了一套引物,结合混合集群分析法(BSA),对油菜隐性细胞核雄性不育两用系430AB的不育与可育DNA池进行筛选,用在不育和可育DNA池间存在差异的引物再对430AB群体进行检测,获得了与隐性核不育基因m s连锁的3个srap标记,即m11 e33270、m16 e7280和m16 e17370,它们位于核不育基因的同一侧,遗传图距分别为4.7 cM、20.1 cM和26.4 cM。

摘要：以中国9个省份和地区的86份芥菜种质资源为供试材料,利用srap分子标记和DNA指纹图谱分析软件,绘制芥菜遗传资源基因组DNA指纹图谱。从270对srap引物中筛选出40对多态性明显、条带清晰的引物组合,对86份供试材料基因组DNA分子进行扩增,共扩增出632条谱带,其中多态性条带427条,多态性比率为67.56%,表明芥菜种质资源遗传多样性较丰富。以供试的86份芥菜种质资源的srap扩增条带为基础,建立供试材料扩增条带指纹数据库的Excel文件,然后利用自主开发的DNA指纹图谱软件,构建86份芥菜种质资源的DNA指纹图谱,获得了所有芥菜种质资源的分子"身份证"。结果表明,srap分子标记非常适合芥菜DNA指纹图谱的构建。

摘要：以4个代表性海雀稗(Paspalum vaginatum)种质的叶片DNA为模板,采用L9(34)正交试验设计,对影响海雀稗srap-PCR反应的Mg^(2+)、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶的用量进行了优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增的影响,以确定适合海雀稗的srap-PCR最佳反应体系。结果表明:海雀稗srap-PCR最佳反应体系为10×PCR buffer 1μL、模板DNA50ng、Mg2+2.5mmol·L^(-1)、dNTP150μmol·L^(-1)、引物0.4μmol·L^(-1)、TaqDNA聚合酶1.0U,总体积10μL。利用该反应体系从100对引物中筛选出可扩增清晰条带的引物83对,在83对引物中选出多态性丰富的引物44对。srap-PCR反应体系的优化及引物筛选,为今后利用srap标记技术进行海雀稗遗传多样性研究、基因定位、遗传图谱的构建以及分子标记辅助育种提供技术支持。

摘要：百合是世界著名的五大鲜切花之一,在国内外花卉市场上十分畅销,有着显著的经济效益。但在百合的销售和消费过程中,存在一个突出的问题是花药产生的大量花粉污染花瓣和衣物。为了解决这一问题,目前主要采用手工摘除花药的方法,此法费时费力,不仅增加了切花的成本,而且也降低了百合的商品价值和观赏性。因此,市场迫切需要无花粉或少花粉的百合品种。本研究旨在通过研究亚洲百合无花粉分离群体的srap标记特征,筛选与无花粉性状相连锁的srap标记,为培育观赏性好、无花粉污染的百合新品种提供依据。试验以亚洲百合‘H08-03’(♀)与‘Pollyanna’(♂)杂交获得的F1代分离群体为试材。其中,‘Pollyanna’的花粉量正常,编号‘H08-03’的材料无花粉,F1代中有花粉子代和无花粉子代个数分别为54和51个基因型。采用L16(45)正交设计,对影响srap-PCR反应体系的Mg2+、d NTPs、Taq酶、引物和模板DNA等5因素进行4个水平的优化试验,结合正交直观分析和方差分析,对影响反应较大的几个因素进行单因素实验,以确定最为合适的PCR反应各因素的浓度。之后对两步退火温度分别进行单因素分析,最终确定亚洲百合srap-PCR最佳的反应体系。应用建立的srap体系,结合BSA法,针对无花粉和有花粉基因型分别混池,对该分离群体进行连锁分析,在无花粉池和有花粉池之间筛选272对srap引物组合,以期找出两基因池扩增存在差异条带的引物。将扩增存在差异的引物对用于群体的单株验证,验证该引物对在打开基因池后于分离群体单株间是否存在上述同样差异。若存在同样差异,对其特异片段进行回收、克隆和测序。经正交直观分析和方差分析的结果表明:Mg2+、Taq酶、模板DNA三个因素对亚洲百合srap-PCR反应影响较大,对其进行单因素梯度实验后,最终确定了亚洲百合srap-PCR最佳的反应体系为:20μL体系,模板DNA约100 ng,1×PCR Buffer,3.5 mmol·L-2Mg2+,0.6 mmol·L-2d NTPs,上下游引物各0.5μmol·L-2,Taq酶3 U,不足部分以dd H2O补足。PCR反应程序的两步最适退火温度第一步为35℃,第二步为53℃。应用建立的srap体系,对272对引物进行多态性筛选,最终筛选出53对扩增多态性丰富且稳定的引物对。53对引物中获得了与无花粉性状连锁的srap标记3个,分别是EM2/ME3、EM2/ME9和EM17/ME14。并成功对EM2/ME3标记扩增出的特异性片段进行回收、克隆和测序,得到了该片段376 bp的碱基序列。该标记可用于亚洲百合无花粉性状的早期分子辅助育种。

摘要：以亚麻叶片DNA为模板,以Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物和Taq DNA聚合酶进行4因素3水平正交试验设计,对亚麻srap反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了亚麻的srap最佳反应体系.结果表明:亚麻srap-PCR最佳反应体系为2.5μL 10×Loading buffer、Mg2+浓度3.0mmol/L、dNTPs浓度0.25mmol/L、引物浓度0.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0U、模板DNA 75ng,总体积为25μL.各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2+浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小.运用该体系对15份不同来源亚麻品种进行验证,证明该体系稳定可靠,并从169个srap引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的引物组合21个.

摘要：利用相关序列扩增多态性(Sequence Related Amplified Polymorphism,srap)技术分析"全红"和"粉玉"瓯江彩鲤,筛选与瓯江彩鲤体色相关的分子遗传标记。从88个srap引物组合筛选出的12个引物组合共获得扩增条带104个,并筛选出1个srap特异扩增带,即"全红"瓯江彩鲤家系SR2,7173 bp带。该条srap特异扩增条带经回收、克隆和测序,并将测序结果进行BLAST分析,发现该片段在GenBank中与斑马鱼的POl多蛋白基因和尿红素基因有较高的同源性。根据序列信息分别设计了4对正、反向引物(22—26 bp)。用4对引物分别在"全红"瓯江彩鲤F2和"粉玉"瓯江彩鲤F2群体中进行PCR扩增,仅发现SC-3(154 bp)能够在"全红"瓯江彩鲤群体中特异扩增,而且在"粉玉"瓯江彩鲤F2群体中未出现此扩增带。采用大样本对该SC-3标记进行验证,结果发现,在"全红"瓯江彩鲤群体中呈现阳性,而在"粉玉"瓯江彩鲤群体中为阴性,可以区分这两种群体。因此SC-3标记可以作为"全红"瓯江彩鲤群体一个重要的分子遗传特征指标,为进一步进行分子标记辅助育种奠定了基础。

摘要：以猕猴桃属(Actinidia Lindl.)不同种幼嫩叶片为材料,建立了基因组DNA提取的改良SDS法,在此基础上采用正交试验设计和单因素分析相结合的方法,建立了适合猕猴桃srap分析的优化体系,即在20μL总的反应体系中包括:DNA(40 ng·μL^(-1))1μL、Taq DNA酶(5 U·μL^(-1))0.2μL、d NTPs(2.5 mmol·L^(-1))1.4μL、引物(10μmol·L^(-1))各1.5μL、Mg^(2+)(25 mmol·L^(-1))2.0μL、10×缓冲液2.5μL、dd H2O 9.9μL。利用该体系对32份猕猴桃品种资源进行遗传多样性和亲缘关系分析,结果表明14条引物共扩增出275个多态性位点,多态性百分率为100%,srap可以作为猕猴桃资源亲缘关系研究的有效标记;在遗传相似系数0.73水平处,供试材料可区分为4组,分别是中华猕猴桃、美味猕猴桃、黑蕊猕猴桃和毛花猕猴桃组。聚类结果表明中华猕猴桃与美味猕猴桃有着非常近的亲缘关系,毛花猕猴桃与中华猕猴桃之间的亲缘关系较远,黑蕊猕猴桃与美味猕猴桃之间亲缘关系可能较近。

摘要：采用L9(34)正交试验设计方法,对草地早熟禾(Poa pratensis)基因组DNA srap-PCR反应体系中的TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物及dNTP四因素的用量进行优化,并比较不同模板DNA用量对扩增的影响,建立草地早熟禾srap-PCR最佳反应体系,同时,利用该体系对srap引物进行筛选。结果表明,草地早熟禾srap-PCR最佳反应体系为Taq DNA聚合酶1.0U、Mg2+1.75mmol.L-1、引物0.25μmol.L-1、dNTP 220μmol.L-1、40ng模板DNA、2μL 10×PCR buffer,总体积20μL。运用该体系从100对srap引物中筛选出43对引物能够产生清晰稳定的扩增条带且多态性丰富。优化体系的建立及引物的筛选可为今后利用srap标记技术对草地早熟禾进行遗传多样性分析、图谱构建、种质资源鉴定奠定技术基础。

摘要：以禺毛茛叶片DNA为模板，采用正交试验设计，以10×Buffer、Mg2＋、dNTP和引物4种因素3个水平，对禺毛莨srap反应体系进行研究，并比较了不同浓度模板DNA、Taq酶用量对扩增效果的影响，建立了禺毛茛的srap最佳反应体系。结果表明，禺毛莨srap—PCR最佳反应体系为：20μl反应体系中，10×Buffer2．5μl，25mmol／LMg^2＋2.5μl，2mmol／LdNTPs1．5μ1，5μmol／L引物1．0μl，模板量为100—200ng，Taq酶0．5U。运用该体系对10份禺毛茛进行验证，证明该体系稳定可靠，并从100个srap引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的36个引物组合。这一优化的体系及多态性引物组合为利用srap标记技术进行毛茛属植物分子遗传学研究提供了科学依据。

摘要：以白桦(Betula platyphlla Suk)基因组DNA为模板,利用趋势面设计对白桦srap-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物P)在3个水平上进行优化试验,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了白桦srap-PCR反应的最佳体系。该反应体系为20μL:0.21g/LDNA,1.5μL;25mmol/LMg2+,1.4μL;5U/μLTaq酶,0.25μL;2.5mmol/L,2μL;10μm/L引物,0.35μL。PCR反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸1min,5个循环;94℃变性1min,50℃复性1min,72℃延伸1min,30个循环,72℃延伸7min。