摘要：【目的】建立云南栘[木衣]srap-PCR最佳反应体系并筛选srap-PCR多态性引物组合。【方法】以木里、澜沧和盈江3个天然群体的云南栘[木衣]嫩叶为试验材料,采用改进后的CTAB法提取云南栘[木衣]基因组DNA。利用L16(45)的正交设计对Taq DNA聚合酶、Mg^(2+)、dNTPs、模板DNA及引物5种因素进行优化,建立云南栘[木衣]srap-PCR最佳反应体系,并从100对引物组合中筛选srap-PCR多态性较高的引物组合。【结果】云南栘[木衣]srap-PCR最佳反应体系(25μL):Taq DNA聚合酶0.5 U,Mg^(2+)2.5 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,模板DNA 80 ng,引物0.8μmol/L。各因素对云南栘[木衣]srap-PCR反应体系的影响由小到大排列为:dNTPs<模板DNA<Taq DNA聚合酶<Mg^(2+)<引物。利用木里、澜沧和盈江3个天然群体的云南栘[木衣]基因组DNA对建立的体系进行验证,筛选出的20对引物组合共扩增出212个位点,其中多态性位点187个,占比为88.21%。【结论】建立了稳定可靠的云南栘[木衣]srap-PCR体系,为后续云南栘[木衣]遗传多样性的研究提供支持。

摘要：以芒果基因组DNA为模板,采用正交试验对模板DNA含量、引物浓度、2×Taq PCR Master Mix含量进行3因素5水平正交试验优化。结果表明,相关序列扩增多态性PCR(sequence related amplified polymorphism,srapPCR)最佳反应体系为:30 ng模板DNA、0.3μmol/L引物、10μL 2×Taq PCR Master Mix,总体积为25μL。运用该体系对10份芒果种质材料进行验证,证明该体系稳定可靠,并从100对引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的36对引物组合。

摘要：利用L9(34)正交试验设计,对影响PCR反应的TaqDNA聚合酶量、dNTP浓度、Mg2+浓度和引物浓度4个因素以及模板DNA浓度进行了三角梅srap-PCR扩增反应条件优化研究,并对引物进行了全面筛选.三角梅srap-PCR优化反应体系结果为:2.5μL 10×PCR buffer、60ng模板DNA、TaqDNA聚合酶1.0U、dNTP 0.25mmol/L、Mg2+2.5mmol/L、引物0.3μmol/L,总体积25μL.运用该结果从208对引物组合中共筛选出扩增条带清晰,多态性丰富的srap引物27对.优化体系的建立及其引物的筛选为今后利用srap标记技术进行三角梅遗传分析、图谱构建、基因定位与种质资源鉴定奠定了技术基础.

摘要：相关序列扩增多态性（Sequence-related amplified polymophism,srap）是2001年由Li和Quiros开发的一种基于PCR的新型分子标记技术[1]。与RAPD、AFLP、SSR等标记方法相比,srap具有简单、高效、高共显性、重复性好、易测序等优点,已经用于许多植物的种子纯度检测、杂种鉴定、遗传多样性分析、指纹图谱及遗传连锁图的构建等[2-8]。

摘要：以改良CTAB法提取的广藿香叶片DNA为模板,采用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4因素3水平,对srap扩增效果进行研究,比较不同模板DNA浓度对PCR扩增的影响,确立适合广藿香srap-PCR反应的最佳体系。利用srap-PCR优化体系对引物进行了全面筛选。结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响,总体积20μL的srap-PCR优化反应体系中含有:2μL 10×buffer、20 ng模板DNA、1.5 mmol/L Mg2+、250μmol/L dNTP、0.3μmol/L Primer、TaqDNA聚合酶1.5 U。运用该体系对部分广藿香单株进行检验,证明该体系稳定可靠;以此体系为基础从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的srap引物18对。

摘要：以SDS法提取的结缕草属植物叶片DNA为模板,分别采用单因子试验和正交设计试验2种方法,对影响结缕草属植物srap-PCR的Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶和模板DNA五个因素进行优化试验。单因子试验分别研究各因素在多水平条件下对srap-PCR反应体系的影响,得到最佳反应条件。正交设计采用L16(45)方案,综合考虑各因素间的相互作用,通过直观分析法获得各影响因素的最佳反应水平。根据4对引物对6份结缕草属植物材料扩增结果的验证比较,2种方法所获得的最佳反应体系存在一定的差异。通过综合比较和分析2种方法的优化体系扩增出的条带数、多态性条带数及多态性比率,最终建立了结缕草属植物srap-PCR的最佳反应体系:Mg2+2.00 mmol/L、dNTP 220μmol/L、引物0.20μmol/L、Taq DNA聚合酶0.50 U、模板DNA 60 ng、2μL 10×buffer,总体积为20μL。这一优化体系的建立为今后利用srap标记技术进行结缕草属植物遗传多样性、种质鉴定、遗传连锁图谱及亲缘关系分析等方面的研究提供了科学的依据。

摘要：以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对假俭草srap反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的srap最佳反应体系。结果表明,假俭草srap-PCR最佳反应体系为:2μL 10×PCR buffer、60 ng模板DNA、Mg2+1.50 mmol/L、dNTP 260μmol/L、引物0.25μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U,总体积为20μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2+浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小。运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个srap引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用srap标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据。

摘要：以冬枣为材料,采用正交设计L9(23)对srap-PCR反应体系的2个因素(dNTP浓度、Mg2+浓度)在3个水平上进行优化试验。在此基础上,比较不同Taq DNA聚合酶浓度和模板DNA用量对扩增效果的影响,最终建立适合冬枣srap扩增体系。结果表明,srap-PCR最佳反应体系为:在20μL总反应体系中,含Mg2+1.80mmol/L、dNTP 0.2mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、模板DNA 60ng及引物0.5μmol/L。并运用5对引物对该体系的重复性和稳定性进行验证,使结果更加科学可靠。

摘要：利用正交设计,从Mg2+、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4种因素3个水平以及不同的模板DNA浓度来优化狗牙根srap-PCR反应体系,并对引物进行了全面筛选。狗牙根srap-PCR优化反应体系结果为:2μL 10×buffer4、0 ng模板DNA、Mg2+1.25 mmol/Ld、NTP 260μmol/L、引物0.2μmol/L、Taq DNA聚合酶1.0 U,总体积20μL。运用该结果从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的srap引物34对。优化体系的建立及其引物的筛选为今后利用srap标记技术进行狗牙根遗传分析、图谱构建、基因定位与种质资源鉴定奠定了技术基础。

摘要：本研究利用81对SSR引物和6对srap引物组合对23个中山杉品种及其父母本共26个基因型进行了遗传分析及指纹图谱构建。研究表明,至少利用7个SSR位点组合可有效区分22个基因型,所有81个SSR标记均不能准确区分中山杉149与302以及中山杉406与407,在此基础上,利用筛选出的2对srap标记可将未区分的4个无性系加以区分,最终构建了26个基因型的DNA指纹图谱,各基因型间遗传相似系数在0.40~0.96之间,通过聚类分析可将26个基因型分为两大类。研究结果为中山杉品种区分、鉴定及分子育种提供了重要的工具。