摘要：用L25(56)正交设计建立和优化糯玉米ssr-pcr反应体系;利用370对ssr引物对糯玉米两亲本及F1进行扩增,筛选抗丝黑穗病的相关引物。结果表明:20μL糯玉米ssr-pcr最优反应体系为1.5 U DNA聚合酶,1.0 nmol/μL镁离子,80 ng模板DNA,0.1 pmol/μL引物,0.15μmol/μL d NTPs,1倍扩增缓冲液;370对ssr引物对两亲本及F1进行扩增的条带显示,有差异且条带清晰的引物为87对。确立了糯玉米ssr-pcr最优反应体系,筛选并得到了87对多态性引物。

摘要：为构建高密度苦瓜ssr分子标记遗传图谱,利用正交设计L16(45)对苦瓜ssr-pcr体系进行优化。采用该体系和本实验室开发的300对ssr引物对4种表型差异较大的苦瓜材料基因组DNA进行了多态性引物筛选,并用筛选出来的多态性引物对黄瓜、甜瓜、西瓜、丝瓜、冬瓜、南瓜进行了pcr扩增,研究了苦瓜ssr引物对6种瓜类作物扩增的通用性及多态性。优化后的ssr反应体系为:d NTPs(2.5 mmol/L)0.5μL、Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.1μL、10×pcr-Buffer 1.5μL、ssr引物(10μmol/L)0.6μL、模板DNA(100 ng/μL)70 ng,总反应体系为10μL。在苦瓜300对ssr引物中,筛选出49对条带清晰的多态性引物,多态性比率为16.3%。其中苦瓜ssr引物对黄瓜、甜瓜、西瓜、丝瓜、冬瓜、南瓜扩增的通用性分别为61.2%、51.0%、59.2%、57.1%、49.0%、59.2%;每个物种不同类型间的多态性比率排序为丝瓜(22.4%)>西瓜(16.3%)>甜瓜(14.3%)、冬瓜(14.3%)>黄瓜(8.2%)>南瓜(2.0%)。即有棱丝瓜和无棱丝瓜之间、圆形西瓜和椭圆形西瓜之间多态性较高,瓜用南瓜和叶用南瓜之间多态性比率最低。说明部分苦瓜的ssr标记在其他葫芦科作物中具有通用性,并且在不同物种间扩增多态性存在明显差异,本研究将为葫芦科其他作物分子标记研究及后续苦瓜分子标记辅助育种和比较基因组等方面的研究和应用提供依据。

摘要：以广西割手密(S. spontanuem L.)79-9为材料,利用SDS法提取基因组DNA,采用正交试验设计优化建立了一套适用于割手密的ssr-pcr反应体系,即在25μL反应体系中包含10×pcr Buffer(Mg2+free)、模板DNA30ng、Mg2+2.5mmol/L、dNTP0.24μmol/L、引物0.6μmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U.运用该体系对其它4份割手密进行了检验,扩增带型清晰,证明该体系稳定可靠.

摘要：为建立适宜玉米ssr-pcr的反应体系和扩增程序,利用正交设计L16(45)表,对反应体系的模板DNA、dNTPs、Primers、Taq DNA聚合酶的浓度进行4因素4水平优化筛选和扩增程序的优化,确立了最优反应体系和扩增程序。即在10μL体系中,模板DNA 20 ng,1×pcr buffer,dNTPs62.5 pmol/μL,Primers0.25 pmol/μL,Taq DNA polymerase 0.5U。反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性45s,60℃退火45s,72℃延伸1min,32个循环;72℃延伸5min,4℃保存。使用300对ssr引物对重组近交系的两亲本扩增,筛选出条带清晰,有差异的引物94对,用于基因连锁图谱构建和QTL定位。

摘要：本项研究以云南松实生苗幼嫩针叶为材料,采用单因素试验设计,分析云南松ssr-pcr扩增反应体系中各组分对扩增结果的影响,并进一步采用正交试验设计对ssr-pcr扩增反应程序进行优化。结果表明,在15μL ssr-pcr反应体系中包括,1×Taq pcr Buffer,模板DNA用量30 ng,Taq聚合酶用量1.0 U,0.2 mmol·L-1dNTPs,3.0 mmol·L-1Mg2+以及正、反引物各0.2μmol·L-1;扩增反应程序为,94℃预变性4 min;94℃变性30 s,退火30 s,72℃延伸45 s,35个循环;最后72℃延伸10 min,4℃保存。该反应条件的建立为开展云南松种质资源ssr分子标记研究提供了参考依据。

摘要：为建立稳定的香菇ssr技术体系,采用L16(45)正交试验设计,对影响香菇ssr-pcr的主要因素进行了优化筛选,建立了最佳的反应体系。在20μl反应体系中,包含1.5mmol/LMg2+,75ng模板DNA,0.25mmol/L dNTPs,0.50μmol/L引物及1.5UTaq酶。梯度pcr试验筛选得到相应引物的最佳退火温度为62℃。以该体系为基础,应用5对引物扩增8个香菇菌株的基因组DNA,扩增条带清晰稳定,聚类分析结果能较好地反映供试菌株的地理来源关系。以0.5的相似性为分割点,8个菌株可分成2大类群。类群Ⅰ主要由北方菌株组成,类群Ⅱ由南方菌株组成。该研究为ssr标记技术在香菇分子生物学研究方面的应用奠定了基础。

摘要：应用单因素实验和L16(44)正交设计对影响美洲南瓜ssr-pcr的主要参数进行优化,建立适合美洲南瓜ssr-pcr反应的最佳体系。结果表明,不同水平的各因素对pcr反应结果均有影响,优化后美洲南瓜ssr-pcr反应体系(20μL)为:1.00μmol.L-1引物、0.150 mmol.L-1dNTP、0.9 U Taq酶、50 ng DNA模板。运用优化后的反应体系对美洲南瓜进行多态性引物的筛选,从300对引物中筛选出68对扩增条带清晰、多态性丰富的ssr引物。

摘要：为了有效的利用ssr-pcr对仁用杏远缘杂交后代进行早期鉴定,采用正交设计,对仁用杏杂交苗ssr-pcr反应的5因素4水平进行试验,通过极差分析法对结果进行分析,建立了仁用杏杂交苗ssr-pcr反应的最佳体系:即在20μl反应体系中,1×buffer、2.0mM/L Mg2+、0.25mM/L dNTPs、0.25μM/L Primer、60ng/20μl模板DNA和0.05U/μl Taq酶。

摘要：为加强紫薇分子遗传学研究,以紫薇叶片DNA为模板,采用4因素(模板浓度、dNTP、引物浓度、酶浓度)3水平的L9(34)正交设计,优化紫薇的ssr-pcr反应体系,并对24对紫薇ssr引物进行了筛选。结果表明:紫薇10μLssr-pcr的最优反应体系为:Taq酶0.2U、Mg2+2.5mmol·L-1、dNTP 0.15mmol·L-1、Fprimer 0.25mmol·L-1、R-primer 0.25mmol·L-1、DNA 60ng,ddH2O补至10μL;24对EST-ssr引物筛选出可扩增出条带的引物23对,其中16对具有多态性,共扩增出清晰条带68条,差异条带39条。