摘要：瘦素受体(leptin receptor, LEPR)为Ⅰ型细胞因子受体家族的单一跨膜信号转导复合物,是瘦素(leptin, LEP)参与调控乳腺上皮细胞生长和凋亡的重要中介物质。信号转导及转录激活蛋白-5a(signal transducer and activator of transcription-5a, stat5a)介导大约90%的妊娠期乳腺上皮乳蛋白的合成。为了解LEP对牦牛乳腺上皮细胞(mammary epithelial cells, MECs)中LEPR和stat5a表达的作用特点及催乳素(prolactin, PRL)对LEP的功能发挥可能产生的影响,试验设计有、无PRL(500μg/L)刺激时,不同质量浓度LEP(0,50,100,200,400,800μg/L)作用牦牛MECs 48 h,通过RT-qPCR检测不同质量浓度LEP对牦牛MECs stat5a mRNA表达水平的影响,Western blot技术检测stat5a及LEPR蛋白的表达特点。结果显示,随着LEP作用质量浓度的升高,stat5a mRNA的相对表达水平呈现先上升后降低的趋势,当LEP质量浓度为200μg/L时,其相对表达水平最高(P<0.05)。无PRL存在时,LEPR蛋白表达水平随LEP质量浓度的增大逐渐降低;而当LEP质量浓度为100,200μg/L时,对stat5a的蛋白水平表现出显著抑制作用(P<0.05)。而有PRL存在时,LEP质量浓度为200μg/L时,LEPR蛋白相对表达量达到最高;而stat5a在LEP质量浓度为100,200μg/L时蛋白表达水平较高(P<0.05)。LEP在有、无PRL参与下,对LEPR、stat5a的表达有不同的影响,可能是因为有PRL存在时,结合受体引起相关机制反应,进而导致蛋白表达有差异。

摘要：利用贵州黑山羊构建DNA池,设计引物扩增stat5a基因第13外显子及部分内含子序列。利用生物信息学软件分析SNPs位点对stat5a基因RNA二级结构、stat5a蛋白二级及三级结构的影响。结果表明,在扩增的stat5a基因中筛选到2个SNPs:T+1641G和G+1248T,其中T+1641G为脯氨酸(Pro)的同义突变,G+1248T为错义突变,导致编码的缬氨酸(Val)变为苯丙氨酸(Phe)。SNPs位点对stat5a基因RNA二级结构和stat5a蛋白结构均有一定影响。

摘要：为了解转录激活与信号转导因子5(stat5)在水牛乳腺发育及泌乳生理中的功能,对水牛stat5a和stat5b基因的5′调控区启动子序列进行了克隆,并比较其活性.根据GenBank已公布的牛stat5a和stat5b基因序列设计特异性引物,以广西本地水牛乳腺组织基因组DNA为模板,通过PCR法分别扩增不同长度stat5a和stat5b基因启动子片段并进行生物信息学分析.结果表明:克隆得到的水牛stat5a基因启动子片段(P1和P2)大小是500bp,700bp,stat5b基因启动子片段(P3,P4和P5)大小是500bp,800bp,1 500bp.在线分析结果显示,仅P2片段中存在高甲基化位点,且富含SP1,AP2等转录因子结合位点.将构建的不同长度启动子片段分别连入pGL3-Basic载体,分别转染水牛乳腺上皮细胞,检测荧光素酶表达水平.与未转染组相比,P1~P5质粒转染组的荧光素酶比值均显著提高(p<0.05);添加5mg/mL质量浓度催乳素(PRL)处理乳腺上皮细胞,P3质粒转染组的荧光素酶比值显著高于其他各组(p<0.05).以上结果表明,水牛stat5a和stat5b基因启动子活性均受到PRL调节,两者表达水平在水牛乳腺上皮细胞中不同,且stat5b基因表达受PRL调控更为明显.

摘要：[目的]信号转导及转录激活因子(stat5a)基因主要参与哺乳动物乳腺组织中细胞因子的信号转导,对泌乳活动具有重要的调控作用。[方法]根据牛的stat5a基因序列设计引物,本文采用直接测序和PCR-RFLP技术首次研究了槟榔江水牛stat5a基因多态性。[结果]共检测到38个SNP位点,其中4个SNP位于外显子,34个SNP位于内含子,4个外显子SNP没有导致氨基酸的变化,属于同义突变。内含子15中的一个C/T变异产生了一个MspI酶切位点,因此我们建立了PCR-RFLP检测标记。本研究计算了24个SNP位点在槟榔江水牛群体中的等位基因频率及基因型频率,结果显示21个处于Hardy-Weinberg平衡状态,3个偏离Hardy-Weinberg平衡状态。[结论]本研究结果表明,槟榔江水牛stat5a基因存在高度多态性,可能与槟榔江水牛的遗传背景有关。SNP的发现及PCR-RFLP标记的建立为进一步研究STA5A基因变异与槟榔江水牛经济性状的关系提供了重要基础资料。