摘要：目的筛选针对survivin的siRNA,并研究其对肝癌细胞7721的影响。方法设计3条survivin基因的siRNA,并合成shRNA的模板,克隆至载体pshRNA-Lentivector载体。转染7721细胞,筛选有效序列,并使用这一载体转染7721细胞对,并对其增殖、周期和凋亡进行检测。结果测序验证survivin siRNA表达载体构建成功,并通过转染实验表明3号载体可以有效干扰survivin的表达。7721转染后,细胞增殖明显降低,并且周期分析表明S+M期细胞从43.3%下降到18.0%,凋亡细胞比例则从对照组0.14%增加到6.30%。结论siRNA表达载体转染可以有效降低7721细胞株中survivin的表达并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

摘要：目的利用RNA干扰(RNAi)技术,以survivin为靶基因,设计构建重组表达载体,并进行测序鉴定.方法设计具有短发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pSilencer3.1-H1-hygro中构建重组表达载体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,并进行序列测定.结果将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,经酶切和测序鉴定确实为所需序列.结论survivin靶向RNA干扰重组表达载体的构建成功,可利用所得的小RNA序列干扰survivin基因的mRNA转录,供抗肿瘤研究参考.

摘要：目的构建survivin的shRNA表达质粒并将其导入白血病细胞株HL-60细胞以探讨RNA干扰对HL-60细胞增殖及凋亡的影响。方法设计、合成两对针对survivin的shRNA序列,连接到带有人U6启动子的载体质粒pSINsi-Hu6中,将构建重组质粒命名为pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2。pSIN/shRNA1转染HL60细胞,应用四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果酶切分析和测序证实pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2构建成功。MTT测定显示转染重组质粒pSIN/shRNA1入HL-60细胞48、72和96h后细胞增殖明显受到抑制,分别与阴性对照组、空白对照组组比较,差异有显著性(P<0.05)。流式细胞仪分析pSIN/shRNA1组胞凋亡率达(20.21±0.75)%,明显高于阴性对照组的(2.58±0.48)%和空白对照组的(1.26±0.30)%。结论成功地构建了survivin基因RNAi真核表达载体,且pSIN/shRNA1可序列特异性地抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,为白血病的基因治疗奠定基础。

摘要：目的研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染对肾透明细胞癌786O细胞的survivin蛋白表达、细胞凋亡、增殖的影响,及其对表阿霉素诱导细胞凋亡的作用。方法设计并合成特异性靶向survivin的ASODN及正义寡核苷酸(SODN),将其转入786O细胞。设空白对照组、脂质体对照组、SODN组和600nmol/LASODN组,处理24h后收获各组细胞。透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数。结果ASODN组的细胞呈典型凋亡的形态学改变,而对照组细胞生长良好;ASODN组细胞survivin表达减弱,凋亡指数明显升高(P<0.05);转染ASODN24h后,表阿霉素诱导786O细胞凋亡的作用明显增强。结论survivinASODN能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786O细胞凋亡,抑制786O细胞增殖,并增强表阿霉素诱导的细胞凋亡。

摘要：目的构建靶向人survivin基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,观察其对异位内膜细胞survivin基因的抑制作用。方法设计干扰人survivin基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pGCL-GFP载体,PCR鉴定和测序分析及阳性克隆质粒抽提,在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助质粒和survivin基因重组慢病毒载体导入293T细胞包装病毒,测定病毒滴度。感染人异位子宫内膜细胞,采用RT-PCR测定细胞中survivin mRNA的表达,并与未转染及空转染细胞进行比较。结果慢病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为8×108U/ml。survivin shRNA慢病毒载体感染人异位内膜细胞后,survivin mRNA水平为0.15±0.03,明显低于阴性对照组0.42±0.06和空白对照组0.48±0.08(P<0.01);而阴性对照组与空白对照组相比无统计学差异。结论成功构建针对survivin基因的shRNA慢病毒载体,体外感染人异位内膜细胞后可有效抑制survivin基因的表达,为研究子宫内膜异位症分子病因和基因治疗提供了新的平台。

摘要：目的构建靶向survivin基因及CDK1基因的短发夹样RNA(Short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体。方法根据Genbank报道的survivin序列及CDK1序列,遵循shRNA设计原则设计并合成各自靶向的survivin、CDK1基因的shRNA寡核苷酸序列,构建pU6-shRNA-survivin重组质粒、pU6-shRNA-CDK1重组质粒及pU6-shRNA-survivin-U6-shRNA-CDK1双基因序列串联重组质粒,并进行限制性内切酶酶切及基因测序鉴定。结果经酶切及测序结果分析,pU6-shRNA-survivin重组质粒、pU6-shRNA-CDK1重组质粒及pU6-shRNA-survivin-U6-shRNA-CDK1双基因系列串联重组质粒均成功构建。结论成功构建survivin基因及CDK1基因联合靶向shRNA重组质粒,为进一步研究survivin基因和CDK1基因联合干扰提供了新的方法。

摘要：RNA干扰(RNAi)是一种转录后的基因缄默.它能触发某种转录后监控程序,导致特定mRNA单链的降解[1-3].我们利用RNAi技术,针对survivin基因的2个不同部位设计2对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,用基因重组的方法将其置于质粒pGCsilencer的U6启动子下,构建pGCsi-lencer-survivin siRNA重组质粒,转导人白血病K562细胞,以阻抑survivin基因的过度表达,诱导K562细胞凋亡.期望为肿瘤的基因治疗提供实验基础。

摘要：目的　研究siRNA对肝癌细胞株HepG2中survivin基因表达的抑制作用。方法　设计、合成一对survivin编码基因的反向重复序列 ,中间间隔 9个核苷酸序列 ,通过定向克隆至载体Psilencer2 1,构建siRNA真核表达载体 ,经稳定转染HepG2细胞后应用RT PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。结果　测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT PCR及流式细胞术检测 ,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制Sur vivin基因表达分别达 73%和 75 %。结论　构建的Psilencer (+) survivin重组质粒能有效抑制survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。

摘要：目的 构建抗凋亡因子survivin的短发夹状RNA(shRNA),观察其在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中对survivin基因表达的抑制作用。方法 设计、合成两对survivin编码基因的反向重复序列,中间分别间隔4和8个nt,分别定向克隆至载体pTZU6+1的U6转录启动子下,构建pshRNA—survivin 1和pshRNA—survivin 2重组质粒,与表达survivin基因的质粒pEGFP—C1-survivin共转染肝癌细胞株HepG2和SMMC—7721,荧光显微镜下观察融合蛋白中GFP的表达以分析pshRNA—survivin对survivin基因表达的抑制作用。结果 酶切分析和测序证实pshRNA—survivin 1和pshRNA—survivin 2构建成功;两组shRNA对survivin的表达均有明显的抑制作用,抑制率达80％以上;两重组质粒在HepG2和SMMC—7721两种细胞中抑制目的基因的作用无明显差异;反向重复序列中间隔4或8个nt构建的shRNA,对抑制目的基因的表达无显著差异。结论 构建的pshRNA—survivin重组质粒能有效抑制survivin基因在肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721中的表达。

摘要：目的:构建携带沉寂survivin基因表达特异性siRNA的重组腺病毒载体,观察其在荷瘤动物体内对survivin基因的表达以及对瘤细胞放射敏感性的影响。方法:设计合成针对survivin基因序列的siRNA,构建并重组腺病毒AdEGFP-siR-NA。建立裸鼠SMMC7721肝癌移植瘤模型,分5组进行实验,siRNA+放疗组和siRNA组以AdEGFP-siRNA瘤内多点注射,siRNA(-)组以AdEGFP-siRNA(-)瘤内多点注射,隔日1次,每次2×108pfu/100μl,共5次;单纯放疗组和空白对照组以等量生理盐水代替病毒注射;于第10、12、14、16天siRNA+放疗组和单纯放疗组给予5Gy/次的照射;定时测量瘤体体积;观察周期结束,取瘤组织免疫组化检测survivin蛋白的表达。结果:成功构建并重组表达survivin基因特异性siRNA序列和绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒AdEGFP-siRNA。裸鼠SMMC7721移植瘤在注射AdEGFP-siRNA后生长受到明显抑制,抑瘤率为56.2%;AdEGFP-siRNA病毒治疗和放疗结合,可将抑瘤率提高到82.6%。移植瘤组织免疫组化检查显示,特异性siRNA显著降低了肝癌细胞survivin的表达。结论:survivin特异性siRNA能够沉寂其基因的表达和抑制肿瘤的生长,同时可以提高肿瘤细胞的放射敏感性,改善治疗效果。