摘要：寻求抗HCV疫苗和有效抗病毒药物的探索一直是研究的热点。我们应用生物信息学方法，选择HCV核心（C）区、NS3、NS4、NS5等各区的细胞毒性t淋巴细胞（CtL）表位，进行优势组合，结合中国人人类白细胞抗原（HLA）的频率，设计、合成重组HCV多表位疫苗的基因序列，以达到对CtL表位初步筛选，提高实验成功率的目的，同时为构建多个CtL表位疫苗提供理论依据，为今后HCV疫苗的研究开发积累一定的实践经验。

摘要：目的探讨中国人类免疫缺陷病毒(HIV)/艾滋病(AIDS)患者HIV特异性细胞毒性t淋巴细胞(CtL)应答的特征。方法以HIV-1B、C亚型构建的2个全基因组肽库作为抗原,通过酶联免疫斑点(ELISPOt)法检测HIV/AIDS患者HIV特异性CtL应答。结果无论HIV-1B亚型还是HIV-1C亚型所构建肽库的应答效应和频率主要集中在Gag和Nef蛋白,其他蛋白也有不同程度的应答。HIV-1B、C亚型间应答比较,整体范围大致相同,但单个肽段水平还存在着一定差异,B亚型应答频率最高的是Nef的GPKEPFRDYVDRFYKtLR(5/17,29．4%)和Gag的LWVYHtQ- GYFPDWQNY(5/17,29．4%),C亚型应答频率最高的是Gag的GPKEPFRDYVDRFFKtLR应答频率为35．29%。结论中国人群CtL应答多集中在Gag和Nef蛋白,B、C亚型在单个肽段水平略有差异,提示中国人群的CtL应答研究对设计针对中国人群的HIV疫苗有较重要的意义。

摘要：目的探讨中国长江以南汉族女性系统性红斑狼疮（SLE）患者细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4（CtLA-4）及程序性细胞凋亡-1（PDCD-1）基因多态与环境因素的交互作用。方法采用单纯病例研究设计，收集258例符合条件的患者，应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态（PCR—RFLP）技术检测ctLA-4与PDCD-1基因的单核苷酸多态性（SNPs），分别在显性、隐性、相加及相乘遗传模式下，选择Poisson对数线性模型估计基因一基因、基因一环境交互作用。结果在PDCD-1基因的PD1．6位点，隐性及相加遗传模式下均存在GG基因型与紫外线暴露史的交互作用，OR值分别为3．714（95％CI：1．235～11．179）和3．199（95％CI：1．023～10．004）。在CtLA4-1722位点，显性遗传模式下，存在tt或tC基因型与紫外线暴露史的交互作用，OR值为4．874（95％CI：1．119—21．242）；相乘遗传模式下存在PDCD-1基因的t等位基因与紫外线暴露史的交互作用，OR值为1．470（95％CI：1．047～2．065）；而在相加遗传模式下，tt和tC基因型分别与紫外线暴露史存在交互作用，OR值分别为4．744（95％CI：1．037～21．737）和4．973（95％CI：1．110～22．287）。结论在中国长江以南汉族女性SLE患者中，紫外线暴露史分别与CtLA4及PDCD-1基因多态存在交互作用，提示基因一环境交互作用可能与SLE有关。

摘要：目的设计人端粒酶逆转录酶(h t E R t)的新型病毒样颗粒疫苗,并研究其抗肝癌的作用。方法以阳离子抗原肽为桥梁,将人粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子和h t E R t克隆入真核双表达载体 p t C A E中,再将多肽和核酸疫苗结合于同一疫苗颗粒,转染并鉴定其免疫原性,评价其转染效率,并观察其免疫转基因小鼠后激发特异性细胞毒性t淋巴细胞(CtL)反应的有效性。结果该疫苗可激发特异性 CtL反应,并对肝癌细胞具有特异性杀伤活性。结论成功构建了具有特异性CtL杀伤活性的htERt肽核酸病毒样颗粒疫苗,为进一步探索其体内抗肝癌免疫作用奠定了基础。

摘要：目的:预测及鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CtL表位,为基于表位的结核疫苗研究提供依据。方法:应用SYFPEItHI数据库预测结核杆菌抗原Ag85C序列中可能存在的HLA-A*0201限制性t细胞表位,利用t2细胞株分析各预测的抗原肽与HLA-A*0201分子的亲合力,选取高亲合力肽诱导特异性CtL细胞,检测各高亲合力肽刺激其特异性CtL细胞分泌的IFN-γ水平、在体外的CtL增殖反应以及细胞杀伤毒性,逐步鉴定出Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CtL表位。结果:SYFPEItHI数据库从Ag85C序列中预测到14条能够结合HLA-A*0201分子的抗原肽,其中3个抗原肽(170～178 aa、317～325 aa和144～153 aa)显示与t2细胞上HLA-A*0201分子有高结合力,而抗原肽FLtREMPAWL(144～153 aa)能够诱导大多数HLA-A*0201阳性结核患者及PPD(+)健康志愿者产生特异性CtL细胞,并分泌大量的IFN-γ,能够诱导CtL体外发生增殖,能够产生特异性杀伤活性。结论:成功鉴定出抗原肽FLtREMPAWL(144～153 aa)结核杆菌抗原Ag85C的HLA-A*0201限制性CD8+CtL表位,可作为结核疫苗设计的候选表位,为进一步研发新型有效的抗结核疫苗奠定了基础。

摘要：目的 分析研究不同感染时间和不同途径感染HIV／AIDS感染者覆盖全基因组的CtL应答特征。方法 将75例HIV／AIDS感染者分为3组，血液感染1～2年组（10例）、血液感染〉10年组（43例）和性接触感染1～2年组（22例）；以HIV—lB亚型构建全基因组17个肽库作为抗原，采用ELISpot检测各组HIV特异性CtL应答；采用流式细胞术检测各组CD。计数；采用实时定量tit—PCR检测各组HIV病毒载量。结果血液感染1～2年组、血液感染〉10年组和性接触感染1～2年组感染者对HIV—B亚型17个肽库的平均应答频率分别为40％、65％、23％，经单向方差分析，3组感染者对HIV·1B亚型17个肽库的应答频率差异有统计学意义（F=19．96，P〈0．01）；3组感染者对HIV—B亚型17个肽库总应答强度范围分别为0～5835SFCs／10。PBMC、0～7225SFCs／10。PBMC、0～9740SFCs／IO。PBMC，且3组感染者对HIV—B亚型17个肽库的应答强度差异亦有统计学意义（H=101．90，P〈0．01）；此外，3组感染者对HIV—lB亚型17个肽库的应答广度分别为7（2—11）个、11（9—14）个、4（2—6）个，5组感染者应答广度的差异也有统计学意义（H=34．75，P〈0．01）。3组感染者应答频率、应答强度和应答广度从高到低依次为血液感染〉10年组、血液感染1—2年组、性接触感染1～2年组。不同感染时间和不同感染途径的感染者对Nef肽库和Gag肽库的应答百分比和应答强度均高于其他肽库。cD。计数〈200／~1、CD。计数为200～500／~1和≥500／~15组感染者对17个肽库的总应答强度范围分别为0～18475SFCs／10。PBMC、350～34095SFCs／10。PBMC、490～21550SFCs／IO。PBMC，但差异无统计学意义（H=2．93，P=0．23）；3组感染者CtL应答广度分别为3（0～8）个、10（2～17）个、10（1～17）个，3组间差异有统计学意义（H=14．72，P〈0．01），cD4计数〈200／~1的感染者CtL应答广度低于cD。计数为200—500／~]和≥500／“l组。不同病毒载量3组（〈LDL、LDL一1×10。拷贝／ml和≥1×10。拷贝／m1）标本对17个肽库的总应答强度范围分别为490—18475SFCs／10。PBMC、0～24115SFCs／10。PBMC、770～34095SFCs／10。PBMC，但3组间差异无统计学意义（H=0．79，P=0．67）；应答广度分别为8（1～17）个、11（0～17）个、8（1～16）个，3组间差异也无统计学意义（日=5．27，P=0．07）。结论中国HIV／AIDS感染者中CtL应答多集中在Nef和Gag，这两个抗原为HIV／AIDS感染的优势抗原；感染时间和感染途径对CtL应答可产生显著影响；随感染时间的延长，免疫反应的强度与应答比例均增加。这些信息对设计针对中国人群的AIDS疫苗有较重要意义。

摘要：目的研究中国人群中流行的乙型肝炎病毒(HBV)基因型B型和C型特异性CtL表位的序列特点。方法以国外文献报道的13个HBV的CtL表位氨基酸序列为参考序列,分析其与GenBank下载的45条及作者从乙型肝炎病人血清中扩增的另外5条B型或C型CtL表位氨基酸序列的差别。结果与参考序列相比,本研究分析的B型和C型HBV特异性CtL表位氨基酸序列变异发生频率较高。在本研究分析的13个表位中,变异发生率超过70%的表位在B型HBV有4个,分别是表位FLLtRILtI(A0201,S183-191)、VLQAGFFLL(A0201,S188-196)、ILSPFLPLL(A0201,S382-390)和FLPSDFFPSV(A0201,C18-27),C型HBV有2个,分别是表位ILSPFLPLL(A0201,S382-390)和FLPSDFFPSV(A0201,C18-27)。其中文献中研究最多的HBcAg表位18-27(FLPSDFFPSV),在我国流行的B型和C型HBV中表位的变异率分别高达71%和97%。结论中国人群流行的B型和C型HBV特异性CtL表位与国外文献报道的CtL表位相比在大多数位点上都出现变异,并且不同表位的变异率差异很大,在检测CtL数量和功能时应根据这一特点设计实验。

摘要：目的比较HPV16型E7抗原CtL表位E711-20(YMLDLQPEtt)与其修饰多肽配体APL(YLLDLQPE-Vt)诱发特异CtL免疫应答的能力和抗肿瘤免疫治疗的作用。观察E711-20及其APL的小鼠tC-1细胞肿瘤免除率、存活时间与荷瘤小鼠的肿瘤体积变化,了解其预防和治疗效果。方法以E711-20及其修饰多肽配体(APL)免疫C57BL/6小鼠,测定免疫后小鼠脾淋巴细胞的增殖指数;用LDH释放试验检测免疫后小鼠脾淋巴细胞的CtL杀伤活性。结果脾细胞增殖实验中,3组增殖指数如下:IFA+APL组2.42±0.38,IFA+E711-20组1.68±0.32,IFA组1.07±0.22;CtL杀伤效应实验中,3组靶细胞溶破率(%)如下:IFA+APL组54.21±0.12,IFA+E711-20组62.33±0.46,IFA组0.88±0.07;IFA组肿瘤免除率为0,IFA+E711-20组肿瘤免除率为40%,IFA+APL组肿瘤免除率为80%;荷瘤小鼠中,对照组IFA肿瘤体积迅速增大,E711-20和APL组的肿瘤生长速度较慢。APL免疫诱导的小鼠脾淋巴细胞,其CtL杀伤活性和增殖能力强于E711-20;APL对tC-1肿瘤细胞的预防和治疗效果优于E711-20。结论 APL诱导特异性抗肿瘤免疫应答的能力和抗肿瘤效果优于E711-20,可能为针对HPV16E7抗原的肽疫苗分子设计提供理想的CtL表位。

摘要：目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰技术诱导小鼠树突状细胞OX40L基因沉默对调节性t细胞的影响. 方法 设计针对小鼠OX40L基因的RNA于扰序列,通过外源筛靶筛选出干扰效果最佳的序列.以293t为包装细胞,制备含OX40L的siRNA序列的慢病毒载体OX40L-RNAi-LV和阴性对照载体NC-GFP-LV.采用磁式分选器分离培养骨髓来源的小鼠树突状细胞（DCs）,以MOI为25进行转染,分别将转染OX40L-RNAi-LV（实验组）、转染NC-GFP-LV（阴性对照组）和未转染（空白对照组）的DCs与磁式分选器分选得到的CD4^＋CD25^＋t调节细胞共培养,6 d后通过流式细胞仪检测t调节细胞的增殖和凋亡情况. 结果外源筛靶筛选出干扰效果最佳的RNA干扰序列（靶序列为GCtCAtACAAGAAtGAGtA）,OX40L蛋白表达的抑制率为73.1%.感染复数为25时,慢病毒载体感染DCs的效率为86.4%.DCs与CD4^＋CD25^＋t调节细胞共培养后,实验组的凋亡细胞比例为8.7%,显著低于阴性对照组（20.1%）和空白对照组（19.8%）,F=244.22,P=0.000;而增殖细胞前体频率为38.3%,明显高于阴性对照组（24.5%）和空白对照组（22.9%）,F=95.40,P=0.000.结论 小鼠OX40L的siRNA慢病毒载体可以有效降低树突状细胞OX40L的表达,对体外培养的CD4＋CD25＋t调节细胞具有显著地促进增殖、减少凋亡的作用.