摘要：长期免疫记忆维持是否需要持续性抗原刺激一直是颇有争议的话题,探究该问题本质在于需要阐明记忆性免疫细胞究竟是对抗原产生真正记忆,或记忆性免疫细胞产生及维持只是机体对持续性抗原刺激免疫反应的结果.解决这一争论将给临床疫苗应用提供理论指导,为创新疫苗设计提供思路,也会启发我们开发新的针对自身免疫及肿瘤等人类重大疾病的免疫治疗.

摘要：人类疾病,特别是传染病和癌症,对公共卫生安全和全球经济构成前所未有的挑战。预防和治疗性疫苗的开发是应对人类疾病的优先对策。本文综述了疫苗载体的免疫学原理、t细胞载体疫苗设计策略及疫苗研究进展,为新型疫苗的设计提供新的思路。t细胞可以在机体发生感染后分化成不同的效应t细胞群,它们可以起到清除病原体的作用,关于效应t细胞功能和机制的研究对于设计能够引发基于t细胞免疫的疫苗至关重要。目前很多病毒(例如HIV、HCMV感染)和肿瘤疫苗的研发都侧重于t细胞类疫苗,在所有疫苗种类中,激活t细胞免疫反应的载体疫苗具有显著优势。许多来源的载体,包括病毒载体、细菌载体和核酸载体,它们在抗原提呈能力、免疫原性和保护效力方面都有良好的表现。此外,还总结了t细胞载体疫苗设计的策略,包括确定适当的抗原提呈途径和载体递送途径、确保生物安全性、如何选择合适的疫苗的载体、各种载体疫苗的优缺点等,尤其是mRNA疫苗在应对新冠疫情中发挥了重要的作用。疫苗载体的技术进步将会加速新型疫苗的研发,并且能促进人们对突发公共卫生事件的应对。

摘要：嵌合抗原受体(CAR)以模块化方式设计,由抗原结合区和铰链组成的胞外区、跨膜区以及一个或多个共刺激分子和激活分子组成的胞内信号结构域构成。将CAR分子导入t细胞,使其具有额外的抗原特异性来重新定向靶细胞,并提供必要的激活信号来驱动t细胞的活化[1]。

摘要：嵌合抗原受体(CAR)-t细胞疗法是目前治疗复发难治性急性淋巴细胞白血病的有效方法。近年来,该领域研究发展迅速,尤其在CAR基因结构的改进、CAR-t细胞治疗过程中不良反应的发生及其对策、新技术的应用等方面有了明显的进展。本综述主要阐述CAR-t的结构和新型设计、不良反应及其对策、基因编辑新技术的应用以及提高CAR-t疗法有效性和安全性等方面的进展。

摘要：目的:建立一种高效扩增人t细胞受体(tCR)β链可变区(Vβ)基因的方法。方法:根据tCRVβ26个亚家族基因序列特点设计扩增Vβ基因的上游内引物34条、上游外引物37条,并将内、外上游引物各分为8个简并组。在恒定区(C区)设计下游内、外和测序引物各1条以及扩增Cβ基因的上游引物1条。提取细胞RNA,用PolyA介导反转录后,采用巢式PCR扩增正常人CD8t细胞tCRVβ26个亚家族基因,并用Jurkatt淋巴瘤细胞作为对照。用t-easy载体克隆Rt-PCR产物,对克隆基因进行测序。结果:从正常人的CD8t细胞中扩增到所有tCRVβ亚家族基因,克隆后测序与相应的参考序列同源。从Jurkat细胞扩增出tCRVβ8基因,经测序验证与文献报道一致,且最少可从10个细胞提取的RNA模板中扩增成功。结论:建立的巢式Rt-PCR方法可以高效、广谱地扩增人tCRVβ基因,为进一步进行抗原特异性细胞毒t淋巴细胞的tCR克隆和功能研究打下了良好基础。

摘要：背景与目的:肿瘤细胞可表达FasL,从而诱导表达Fas的t细胞凋亡,即肿瘤细胞的“Fas反击作用”。本研究通过检测抗Fas核酶对小鼠t细胞凋亡的抑制作用,探索增强t细胞抗肿瘤能力的新途径。方法:设计并合成针对小鼠Fas基因的锤头状核酶,检测其对Fas m RNA的体外切割能力。通过电穿孔转染法将其导入小鼠脾脏t细胞,同时设立空白对照组和空载体转染组,通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polym erase chain reaction,Rt-PCR)、W estern blot检测细胞上Fas的表达。细胞经抗Fas的抗体(JO2)作用后,流式细胞仪检测细胞凋亡,M tt法测转染前后细胞的增殖,以乳酸脱氢酶试验检测细胞毒性t细胞的体外杀伤活性。结果:抗Fas核酶能显著切割Fas m RNA,切割效率为60%。核酶组细胞表面的Fas水平显著低于对照组及空载体组(0.4vs.1.1,1.0,P<0.01)。经抗Fas抗体处理后,核酶组细胞的凋亡率明显低于对照组及空载体组(35%vs.86%,87%,P<0.01);核酶组的细胞增殖活性显著高于对照组及空载体组(208%vs.100%,98%,P<0.01);核酶组t细胞的体外杀伤活性明显强于其它2组细胞(67%vs.32%,31%,P<0.01)。结论:抗Fas核酶能显著降低小鼠脾脏t细胞的Fas水平,使细胞免于Fas途径的凋亡,从而增强t细胞的抗瘤能力。

摘要：目的:设计和构建表达PD-1 shRNA的靶向CD19 CAR-t细胞并验证其体外肿瘤细胞杀伤能力。方法:设计并构建表达PD-1 shRNA的CD19 CAR分子基因,将其包装成逆转录病毒载体,通过qPCR法检测病毒载体拷贝数。将慢病毒转导人原代t细胞,获得三种CAR-t细胞,分别为RNAU6-CD19 CAR-t、PD-1 shRNA1-CD19 CAR-t、PD-1 shRNA2-CD19 CAR-t细胞。采用qPCR法检测三种CAR-t细胞中PD-1 mRNA的表达水平,流式细胞术检测三种CAR-t细胞中PD-1表达水平,萤光素酶报告基因实验、流式细胞术检测在不同效靶比时CAR-t细胞对CD19阳性靶细胞(人淋巴瘤daudi细胞)的杀伤功能。结果:RNAU6-CD19 CAR、PD-1 shRNA1-CD19 CAR、PD-1 shRNA2-CD19 CAR三种CAR分子成功包装成逆转录病毒载体,病毒载体拷贝数均高于1×10^(7)拷贝/mL,转导人原代t细胞获得CAR-t细胞,RNAU6-CD19 CAR-t、PD-1 shRNA1-CD19 CAR-t、PD-1 shRNA2-CD19 CAR-t细胞转导效率分别为43.1%、55.1%、41.7%。与RNAU6-CD19 CAR-t细胞相比,PD-1 shRNA1-CD19 CAR-t、PD-1 shRNA2-CD19 CAR-t细胞中PD-1 mRNA表达水平均显著降低(均P<0.01)、细胞表面PD-1表达水平更低(均P<0.01)、体外对daudi细胞的杀伤率更高(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建表达PD-1 shRNA的靶向CD19 CAR-t细胞,其对CD19阳性靶细胞的杀伤率显著提高,PD-1 mRNA及其翻译产物PD-1的表达减少,CAR-t细胞的耗竭减缓。

摘要：嵌合抗原受体(CAR)-t细胞免疫治疗是近年来肿瘤治疗领域最瞩目的成就之一,流式细胞术(FCM)在CAR-t细胞的设计构建、患者入组、CAR-t细胞产品的性能检测、治疗后疗效评价、免疫功能评价、复发机制研究与后续治疗方案的选择等各个环节都起到重要的作用。为了进一步推广与规范FCM在CAR-t细胞免疫治疗相关实验室检测中的应用,《中华检验医学杂志》组织了“流式细胞分析在CAR-t细胞免疫治疗中的应用和研究进展”专题报道,多篇文章分别涵盖FCM在CAR-t细胞免疫治疗中应用的多个方面,包括专家共识、继续教育、专家述评、微小残留病检测、免疫功能和细胞因子检测等,以期促进FCM在CAR-t细胞免疫治疗中应用的规范化,为临床应用提供更大的帮助。

摘要：目的　采用表位重建技术 ,对预测MAGE n抗原HLA A2限制性CtL表位结合活性进行研究。方法　用SYFPEItHI超基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法 ,筛选新的MAGE n抗原HLA A2限制性CtL表位作为候选表位。对预测的抗原表位进行多肽合成 ,并用HPLC进行纯化 ,质谱法 (MS)鉴定。候选表位与HLA A2位点的亲和力及结合稳定性用竞争结合抑制实验、t2结合稳定性实验及MHC 肽复合体稳定性实验测定。结果　用表位预测法筛选MAGE n抗原 5个HLA A2限制性CtL表位为候选表位。QLVFGIEVV(15 9 16 7)、IMPKtGFLI(195 2 0 3)和FLIIVLVMI(2 0 1 2 0 9) 3个表位具有较高的HLA A2结合力 (IC50 6h) ,可作为MAGE n抗原HLA A2限制性CtL候选表位进行进一步研究。结论　表位预测结合表位重建方法可提高肿瘤抗原CtL表位研究的效率。MAGE n抗原HLA A2限制性CtL表位经免疫学鉴定后 ,可望用于新型肝癌治疗性多肽疫苗的设计研究 ,为临床肝癌特异性治疗奠定基础。

摘要：21世纪人口的老龄化对人类社会是一个重大的挑战。我国目前已经步入老年型社会。随着社 会性人口的衰老，与人口衰老相关疾病的发生急剧增加，特别是阿尔采默痴呆(AD)、帕金森 病(PD)、骨质疏松和II型糖尿病为代表的老年性疾病引起的智能衰退、行动障碍、骨折和肾 功能衰竭等严重地影响老人的生活质量，为社会和家庭带来沉重负担。老年性疾病并非简单 地由机体老化所致，也非疾病在老年期的明显表现，但是以老化为其发病基础的。同时，遗 传因素和体内外环境因素在老年性疾病的发生与发展方面起一定作用。然而，目前大多数老 年性疾病研究尚处于资料的积累阶段，迫切需要有科学创意假说的提出，从多个角度全方位 地对老化和老年性疾病的发生机制进行研究，进而为临床提供有效的手段用于老年性疾病的 防治。 衰老或老化（senescence）是机体代谢过程中的一个必然阶段，主要表现为机体对环境刺激 的适应能力减弱以至丧失。老化的机制颇为复杂，有关老化的理论假说也颇多，如氧化损伤 学说、遗传控制学说、体细胞突变学说、衰老符合途径假说等。美国病理学家Wolford在60年代首先提出老化的免疫学假说，认为免疫系统从根本上参加了正常脊椎动物的老化过程 ，是老化过程的主要调节系统之一。老化免疫学旨在研究免疫老化（Immunesenescence）的 发生与发展机制，研究正常脊椎动物免疫系统功能与结构的增龄性变化规律，为高等生物生 命活动研究提供全程性（尤其生命处于衰退阶段时）免疫系统方面的信息，并且探讨免疫老 化对机体抗感染和抗肿瘤机能及其自身免疫病易感性等方面的影响，为解决衰老所致的免疫 相关性疾病的诊断、预防和治疗提供策略与方法。 t淋巴细胞功能降低与数量减少是增龄性免疫系统的主要改变，其中胸腺增龄性萎缩（退化 ）表现尤为明显。t细胞与免疫老化的关系是老化免疫学机制研究的核心内容，其中至少有 以下6项研究为研究者们所关注：其一，t细胞来源于骨髓的前体t细胞，因此老化对t细胞 的影响的第一个证据应在老龄动物或老年人造血发生的研究之中来寻求，老化时干细胞缺陷 受到重视；其二，胸腺是t淋巴细胞发育与成熟的场所，对于成年个体来说，胸腺似乎为 t细胞发育成熟的特殊目的而存在。然而，胸腺随增龄而发生退化，即便是年轻成熟的 个体，其胸腺功能和t细胞产生也随着胸腺退化而表现低下，因此胸腺退化机制的澄清对老 化免疫的深刻理解至关重要；其三，静止成熟的t淋巴细胞在外周是长寿命的,其人类t细胞 一般认为可存活几十年。在此期间，它们也将受到老化过程的影响；其四，t淋巴细胞介导 的免疫应答表现为特异性t细胞克隆的迅速扩增性增殖。此外，记忆性反应也是少数t细胞克 隆增殖的结果。这些增殖性淋巴细胞与老化的关系受到研究者的重视；其五，老化时t细胞 与抗原呈递细胞的关系有待于澄清；其六，老化时t细胞活化时信号传导异常目前引起关注。