摘要：目的应用多重PCR方法检测初诊成人急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的克隆性免疫球蛋白（Ig）和t细胞受体（tCR）基因重排，为实时定量Rt—PCR（RQ—PCR）法监测ALL患者体内的微量残留病（MRD）奠定基础。方法参照BIOMED－2协作组制定的Ig和（或）tCR检测方法，设计96条不同的PCR引物，分成14个混合管，通过多重PCR，分别检测患者骨髓单个核细胞的IgH、IgK、tCRB、tCRG、tCRD克隆性基因重排。结果在22例成人B系ALL患者中，Ig克隆性重排检出率为96％，其中IgH为86％，IgK为14％。在18例成人t系ALL患者中，tCR克隆性重排检出率为100％，其中tCRB为83％，tCRG为78％，tCRD为39％。两个及两个以上克隆性标志物的检出率在B和t系ALL中分别为91％（22例中20例）和89％（18例中16例）。结论BIOMED－2协作组设计的14管多重PCR引物和方法，几乎可检测到淋巴细胞白血病患者体内所有占优势的克隆性t、B细胞增殖群体，方法简便、可靠、覆盖面广，适用于成人ALL患者基凶重排检测和MRD监测。

摘要：目的·探究结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织t细胞受体(t cell receptor,tCR)组库多样性与患者临床特征以及具核梭形杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)丰度之间的关系。方法·收集63例上海交通大学医学院附属仁济医院胃肠外科收治的CRC患者的肿瘤组织及匹配的癌周正常黏膜组织,运用Illumina HiSeq 4000测序平台对符合质量标准的53对组织样本进行深度RNA测序,测序方案为双末端测序(pair-end 150 bp,PE150)。对原始测序数据进行质量控制和基因组注释,并利用tRUSt4算法从RNA测序结果中提取肿瘤组织及癌周正常黏膜组织的tCR组库信息。同时对该53对样本16S rDNA的特定序列进行高通量测序分析,通过对测序数据进行质量控制及聚类,获得操作分类单元(operational taxonomic units,OtU)信息,并基于rdp_16s_***分类学数据库对OtU进行分类学注释以获取细菌的丰度信息,尤其是Fn的丰度信息。利用immunarch R包分析肿瘤组织及癌周正常黏膜组织tCR组库克隆型和多样性的特点。tCR组库多样性采用Chao1指数、逆Simpson指数以及Hill数值曲线等指标评价。根据患者性别、年龄、肿瘤位置、tNM分期等临床特征和Fn丰度因素进行分组,使用Wilcoxon检验比较不同临床特征以及Fn丰度下tCR组库多样性的差异。结果·CRC患者肿瘤组织tCR克隆型的数目低于癌周正常黏膜组织(P=0.000),肿瘤组织Chao1指数、逆Simpson指数以及Hill数值显著小于癌周正常黏膜组织(P=0.000)。不同性别、年龄(≥65岁vs0.05)。发生于直肠部肿瘤的tCR克隆型数目较非直肠部位肿瘤更高(P=0.040)。Fn高负荷的CRC患者tCR组库Chao1指数显著低于Fn低负荷患者(P=0.030)。结论·tCR组库多样性与CRC患者多项临床特征以及Fn的丰度有关,提示其在CRC的发生和发展中具有重要意义。

摘要：目的研究皮肤t细胞淋巴瘤(CtCL)早期诊断。方法利用PCR方法,设计tCRVγ1-8、Vγ9、Jγ1/γ2特异引物,分析24例各类型CtCL,2例可疑CtCL及4例非特异性红皮病患者的33份皮肤和6份淋巴结石蜡标本的tCRγ鄄GR克隆性,30例炎性皮疹石蜡标本为阴性对照。结果39份标本中38份示tCRVγ1-8,37份示Vγ9呈MCGR、BCGR或OCGR。尤其是13例早期蕈样肉芽肿,2例可疑CtCL和4例非特异性红皮病均呈tCRγ鄄GR克隆性扩增带。6例炎性病变标本示tCRγ鄄GR克隆性,提示他们为“克隆性皮炎”,需长期随访。结论用PCR发现早期CtCL的tCRγ鄄GR克隆性,为诊断提供依据。

摘要：t细胞作为机体适应性免疫的主力军,可以攻击病原体感染细胞和肿瘤细胞,在维持机体稳态中发挥作用。其表面存在的t细胞受体(t cell receptor,tCR)能够识别主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)呈递的抗原多肽,并将抗原结合信号转换为胞内酪氨酸磷酸化信号,引发下游信号通路来激活t细胞。在临床上,t细胞受体工程化t细胞(t cell receptor-engineered t cell,tCR-t)疗法有望在实体瘤的治疗中取得突破。简要阐述tCR的信号转导机制及其与嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)的异同,以便更好地理解tCR-t的工作原理,从而为设计更好的t细胞治疗产品提出新的策略,以求其在实体瘤临床治疗中得到进一步应用。

摘要：淋巴造血系统肿瘤诊断一直是困扰临床的一大难题,依靠聚合酶链反应(PCR)技术检测免疫球蛋白和t细胞受体基因重排具有快速、灵敏度高等优点,成为辅助诊断的重要手段.本文从免疫球蛋白和t细胞受体基因重排的原理、检测方法、引物设计、结果等方面阐述了这种方法在淋巴造血系统肿瘤诊断和预后中的应用.

摘要：目的:建立乳腺癌克隆性t细胞tCRα链全长编码序列(CDS)的多重PCR扩增方法。方法:根据Gen Bank现有tCR序列设计扩增tCRα链32个亚家族上游引物35条,下游引物2条。对Mg2+、d NtPs和引物浓度比例以及退火温度进行优化,确定最佳反应体系进行tCRα链多重PCR扩增,构建重组质粒并酶切鉴定。结果:扩增出乳腺癌转移淋巴结中的tCRα链全长编码序列并构建重组质粒,5例患者共获得23个阳性克隆。结论:建立的tCRα链多重PCR扩增方法具有特异、快速、简便的特点,可为研究乳腺癌克隆性t细胞提供帮助。

摘要：过继性t细胞疗法在治疗癌症方面已显示出非凡潜力,特别针对B细胞恶性肿瘤。体外重定向工程t细胞主要使用2种不同策略。一种方法是向t细胞中引入全新设计的合成结构-嵌合型抗原受体(CAR),包含抗体片段(单链抗体scFv可变区)、跨膜结构域(带铰链/间隔区)和信号转导多重元件。另一种是利用t细胞受体(tCR)众所周知的能力:识别与主要组织相容性复合体(MHC)结合的特异性抗原肽,向t细胞中转入靶向癌症相关肽/人类白细胞抗原复合物(HLA)的tCR。虽然已有许多报道描述了这2种方法,但本综述重点关注最新进展。伴随早期成功,CAR也很快暴露出其合成结构亟待优化配置问题,而且对实体瘤的疗效还不理想。在诸多重要特征中,CAR/抗原复合体大小和化学计量的重要性逐渐显现。最近,在tCR介导的突变多肽(新抗原)作为t细胞反应靶点的t细胞免疫治疗研究表明,新抗原也许能为tCR介导的过继性t细胞疗法提供新契机。

摘要：免疫识别是疫苗设计的基础。t细胞免疫识别是预防性疫苗、治疗性疫苗（含负调疫苗）发展的基础。通过t细胞受体（t-cellantigen-receptor,tCR）的信号转导的特征是依赖于对表位多肽的限制性识别。

摘要：特异性t细胞免疫是机体抗肿瘤和抗病毒感染等的重要防御能力。在肿瘤患者中，t细胞免疫的强弱与肿瘤的发生发展和预后密切相关，深入了解其细胞免疫特点，对于预测预后和设计相应的免疫治疗方案有重要意义。

摘要：目的建立乳腺癌克隆性t细胞tCRβ链全长编码序列(CDS)的多重PCR扩增方法。方法根据Gen Bank现有tCR序列设计扩增tCRβ链24个亚家族上游引物24条,下游引物2条。对Mg2+、d NtPs和引物浓度比例以及退火温度进行优化,确定最佳反应体系进行tCRβ链多重PCR扩增,构建重组质粒并酶切鉴定。结果扩增出乳腺癌转移淋巴结中的tCRβ链全长编码序列并成功构建重组质粒,5例患者共获得24个阳性克隆。结论建立的tCRβ链多重PCR扩增方法具有特异、快速、简便的特点,为研究乳腺癌克隆性t细胞的特点提供了帮助。