摘要：目的 用鸡卵清溶菌酶(Hen egg-white lysozyme,HEL)t辅助细胞表位序列替换htNF-α3’末端序列,构建和表达htNF-α新型免疫抑制剂。方法 将重组的htNF-α HEL克隆、表达、纯化后进行初步的生物学活性鉴定。结果 DNA测序分析表明,重组的htNF-α HEL3’末端序列与设计序列完全相同。将其插入pBV220表达载体中,重组菌经42℃诱导4h做SDSPAGE分析,结果显示该免疫抑制剂获得了表达,M_r为17000,其表达量为菌体总蛋白量的30％。Western blot结果证实,该表达蛋白可与抗tNF-α抗体产生免疫反应。对该表达蛋白进行了阴离子交换柱纯化,获得的重组蛋白的纯度可达95％以上。对该蛋白的体外杀伤活性检测表明,该蛋白已完全丧失了tNF-α的体外杀伤活性。结论 上述实验结果证明,tNF-α免疫抑制剂的构建获得了成功,该免疫抑制剂既保持了与tNF-α抗体结合的能力又失去了tNF-α的杀伤活性,为其下一步治疗作用的研究奠定了基础。