摘要：目的:探讨特异性沉默促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver cell-1,PRL-1)基因表达对舌癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法:设计、合成5条针对PRL-1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰序列,构建于慢病毒载体质粒中,PCR电泳及基因测序验证。转染293T细胞,Western blot筛选最佳干扰序列,包装产生慢病毒。转染tca8113细胞,筛选、建立稳定转染细胞株;real-time PCR检测PRL-1基因沉默效率;划痕实验和Transwell实验分别比较慢病毒转染细胞(KD组)、空病毒转染细胞(NC组)及tca8113细胞(CON组)迁移、侵袭能力变化。结果:PCR电泳及基因测序证实5条sh RNA序列定向插入慢病毒载体质粒中。Western blot筛选出PRL-1-sh RNA-1基因沉默效率最高,包装获得慢病毒滴度为7×108 TU/ml。通过转染、筛选,建立了tca8113细胞稳定转染细胞株;real-time PCR测得PRL-1基因m RNA表达明显下降(F=809.120,P=0.000);PRL-1基因沉默后细胞迁移能力降低,穿过人工基底膜的细胞数KD组(25.5±0.4)明显少于NC组(81.5±2.0)和CON组(88.5±2.3)(F=1 092.970,P=0.000)。结论:沉默PRL-1基因表达能有效抑制舌癌细胞迁移、侵袭能力。

摘要：通过Affymetrix寡核苷酸芯片,分别对顺铂敏感及耐药的舌鳞状细胞癌系tca8113和tca8113-CDDP细胞进行检测。结果表明,细胞周期蛋白D1明显上调,应用RNA干扰(RNAi)能高效特异地降解具有同源序列的mRNA,从而导致细胞周期蛋白转录后基因沉默,并确定了siRNA的最佳作用时间和作用浓度,为进一步研究耐药相关基因在口腔鳞状细胞癌耐药中可能发挥的作用,具有重要的研究价值。本实验设计合理,手段先进,结果为临床应用RNA干扰技术提供基础,有创新性,建议以“快速通道”的形式发表。[第一段]