摘要：目的构建tdo2基因敲除的C57BL/6小鼠,初步研究其表型。方法根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并体外转录sgRNA,用显微注射法将Cas9、sgRNA同时注射到小鼠的受精卵。经胚胎移植,获得可能出现多种基因型并存的F0代小鼠。利用PCR法进行基因型判定,获得阳性F0代小鼠。由阳性F0代小鼠与野生型小鼠回交得到F1代杂合子小鼠。阳性F1代杂合子小鼠之间配繁,得到F2代纯合子小鼠。观察和分析纯合子小鼠的生长特性,繁殖能力和子代存活率。Western blot验证tdo2基因敲除纯合子小鼠肝脏组织中tdo2的蛋白表达。结果成功繁育和鉴定出tdo2基因敲除小鼠,PCR法成功鉴别了子代鼠的基因型;Western blot结果表明,tdo2基因敲除小鼠的肝脏组织中tdo2蛋白不表达。tdo2基因敲除小鼠饮食、体质量等未发现异常改变。结论成功建立tdo2基因敲除小鼠,为研究tdo2基因的生物学功能和在疾病中的调控作用提供实验手段。

摘要：目的构建小鼠tdo2基因条件性敲除打靶载体,为建立tdo2基因条件性敲除小鼠奠定基础。方法根据CRISPR/Cas9技术原理,设计并构建单链向导RNA(sgRNA)和Donor载体,以tdo2-201(ENSMUST00000029645.13)转录本的外显子3作为敲除区,在打靶基因两侧各放置一个Loxp元件,建立条件性敲除tdo2第3号外显子的条件性基因打靶载体。将CRISPR/Cas9复合体和Donor载体显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵中,获得阳性F0小鼠,再将阳性F0代小鼠与C57BL/6小鼠交配获得F1代小鼠,并经PCR和基因测序鉴定F1代小鼠基因型。结果结果证实所构建的tdo2基因条件性敲除打靶载体符合设计要求,成功繁育并鉴定出B6/JGpt-tdo2^(em1C)flox/Gpt小鼠。结论成功构建了小鼠tdo2基因条件性敲除打靶载体,为后续进一步构建tdo2基因条件敲除小鼠奠定了基础。