摘要：目的:构建含有野生型或突变型人三叶因子1(Trefoil factor1,tff1)基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,并研究雌激素对上述启动子转录活性的影响。方法:设计人野生型和突变型tff1基因启动子的引物,扩增回收片段,将其克隆到含有荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中构建重组质粒,经双酶切和测序鉴定后转染胆囊癌GBC-SD细胞,24 h后采用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶的表达活性。结果:成功构建了野生型pGL3-tff1质粒和雌激素应答元件(Estrogen response elements,ERE)位点突变的pGL3-tff1-ERE突变质粒,激活蛋白1(Activating protein-1,AP-1)位点突变的pGL3-tff1-AP-1突变质粒以及pGL3-tff1-ERE+AP-1双突变质粒。经双荧光素酶报告基因检测分析,pGL3-tff1质粒和pGL3-tff1-ERE突变质粒均具有基础转录活性,与对照组比较(P0.05)。结论:本研究成功构建了野生型以及突变型tff1启动子质粒,发现非经典雌激素受体结合部位——激活蛋白1(AP-1)位点对雌激素诱导的tff1启动子转录活性增强发挥决定性作用。

摘要：目的探讨稳定下调三叶因子1(trefoil factor 1,tff1)基因对肺癌细胞A549转移及侵袭能力的影响。方法设计并合成tff1基因特异性shRNA干扰序列并构建入p SUPER-retro-puro质粒,将重组质粒转染A549细胞后经嘌呤霉素筛选,建立稳定干扰tff1的A549细胞株,通过划痕实验和Transwell侵袭实验验证稳定下调tff1对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果成功构建特异性干扰质粒tff1-shRNA1、tff1-shRNA2、tff1-shRNA3及对照质粒tff1-sh Control;成功建立tff1稳定下调的A549细胞株及对照细胞株;通过划痕实验证实tff1的沉默表达明显影响A549细胞的迁移能力(P<0.0001)。通过Transwell侵袭实验证实,tff1的沉默表达明显影响A549的侵袭能力(P<0.0001)。结论沉默tff1表达能够显著抑制A549细胞的迁移及侵袭能力,进一步阐明非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的发生发展机制,并为肿瘤的治疗和早期检测提供了新思路。