摘要：目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(tgfβ1)表达的影响。方法 :针对tgfβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的 pcDNA3.1( )载体 (命名为 pcDU6) ,2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由 6碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成tgfβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义tgfβ1RNA的pcDNA3.1( )的载体质粒入 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)半定量分析HPMC中tgfβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中tgfβ1蛋白质水平。结果 :HPMC在 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调tgfβ1的表达 (P 0 .0 5 ) ;pcDNA3.1( )的载体质粒介导的反义RNA组与

摘要：背景:瘢痕的形成涉及多种因素,其中之一是转化生长因子β1(tgfβ1)的高表达,为达到抑制tgfβ1过度表达的目的,尝试用反义tgfβ1抑制瘢痕形成的方法,将基因治疗技术运用于临床医学。目的:探讨反义tgfβ1对Ⅲ度烫伤愈合中瘢痕生成的抑制作用。设计:随机对照、重复测量设计。地点和对象:在上海第二医科大学生物化学教研室完成。清洁级雄性SD大鼠105只,体质量(250±20)g,购于中科院上海实验动物中心。干预:SD大鼠Ⅲ度烫伤后,分3组进行处理:①反义TCFβ1脱氧寡核苷酸。②反义tgfβ1重组质粒。③空白对照。分别于烫伤后l,3,5,14dRT-PCR、免疫组化检测tgfβ1mRNA和蛋白质的表达。烫伤后,,51421,28,60d原位杂交检测Ⅰ型胶原mRNA的表达变化,病理检测炎性细胞浸润反应和胶原分布状况。主要观察指标:①烫伤后l,3,5,14dRT-PCR,tgfβ1mRNA和蛋白质的表达。②烫伤后,,,,514212860dⅠ型胶原mRNA的表达变化。③病理检测炎性细胞浸润反应和胶原分布状况。结果:反义ODN组和反义重组质粒组在烫伤后第1天tgfβ1mRNA表达水平与对照组相比无降低,14d分别为0.176±0.014和0.213±0.071,表达均减少。反义作用组蛋白质的表达在烫伤后周内均为低表tgfβ13达。原位杂交显示对照组在14dⅠ型胶原mRNA开始表达,28d达到高峰,随后减少。