摘要：目的建立一种适合临床常规检测胰岛素受体底物1 (IRS1)rs1801278基因多态性的实验方法。方法随机收集2015年3月~2016年6月解放军第三〇二医院200名健康体检者的外周血标本,设计针对IRS1 rs1801278基因多态性位点的特异性引物和荧光探针,通过taqman-mgb实时荧光聚合酶链反应法检测rs1801278基因多态性,以基因测序法(金标准)进行验证,同时初步探讨IRS1 rs1801278不同基因型在本研究人群中的分布频率。结果 taqman-mgb双荧光探针法鉴别IRS1 rs1801278的3种基因型,与基因测序法结果一致率为100%。IRS1 rs1801278基因多态性中T/T、C/T和C/C基因型在本研究人群中的分布频率分别为0%、1%和99%。结论根据单核苷酸多态性基因型特异性探针和引物所建立的taqman-mgb荧光探针法能快速有效地进行IRS1rs1801278基因多态性分型,结果可靠,操作易行,然而对中国汉族2型糖尿病患者个体化治疗效果的预测价值有限,不建议临床常规开展。

摘要：目的建立检测CYP3A5基因rs776746位点单核苷酸多态性(SNP)的taqman-mgb实时荧光聚合酶链反应(PCR),并分析该位点对他克莫司药物代谢的影响。方法针对CYP3A5基因rs776746位点设计相应引物及双标记探针,建立并评价检测该位点SNP的taqman-mgb实时荧光PCR;收集170例服用他克莫司患者的全血DNA样本,用建立的taqman-mgb实时荧光PCR检测CYP3A5基因型,并分析不同CYP3A5基因型与他克莫司血药浓度剂量比的相关性。结果建立的taqman-mgb基因分析法能够对CYP3A5 rs776746位点基因型进行高效区分,可检测最低含量为0.01 ng水平的DNA样本,并且具有较好的重复性和特异性,其检测结果与测序结果完全一致。170例患者中CYP3A5*1/*1型18例(10.59%)、CYP3A5*1/*3型65例(38.24%)、CYP3A5*3/*3型87例(51.18%);其中104例异体肾移植患者3种基因型的血药浓度剂量比分别为(52.47±35.96)、(77.79±33.80)、(134.80±79.35)(ng/m L)/(mg·kg-1·d-1),各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论建立了一种敏感性高、特异性好、重复性佳、适用于临床快速检测CYP3A5 rs776746 SNP位点的taqman-mgb方法。初步分析显示CYP3A5*3基因型的存在会减弱患者对他克莫司的代谢能力。