摘要：目的探讨胃癌细胞中twist慢病毒表达载体的构建及构建。方法参考Genbank的人twist基因序列设计出1对twist全基因扩增引物,从人胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增twist基因,聚合酶链反应(PCR)产物线性化克隆入慢病毒表达载体GV341中,构建重组载体GV341-twist。将重组载体GV341-twist转染至人胃癌293T细胞包装病毒,免疫荧光检测293T细胞形态改变,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞twist表达水平,实时PCR法检测病毒滴度。结果成功构建了GV341-twist慢病毒表达载体,经限制性酶切后出现651 bp的条带,DNA测序分析证实重组慢病毒载体GV341-twist的插入序列有近100%的正确率,重组慢病毒载体转染293T细胞后,Western blot检测twist融合蛋白为25 kD。实时PCR测定重组慢病毒载体GV341-twist病毒滴度2.00E+8 TU/ml。结论本实验成功构建了人重组慢病毒载体GV341-twist慢病毒表达载体,在人胃癌293T细胞中高效表达了twist蛋白。

摘要：目的 观察twist特异性小分子干扰RNA（siRNA）对乳腺癌细胞生长作用的影响.方法 设计、合成twist特异性siRNA,转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot法检测细胞中twist基因的mRNA和蛋白表达；Western blot法检测细胞浸润、凋亡相关蛋白表达；噻唑蓝（MTT）法及流式细胞术检测细胞生长及凋亡.结果 twist-siRNA转染组与阴性对照组比较,mRNA和蛋白表达量明显降低（0.873±0.071比0.323±0.035、0.964±0.021比0.419±0.010,P＜0.05）；细胞浸润相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达增加（1.102±0.051比1.583±0.031,P＜0.05）；凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达增加（1.059±0.070比1.502±0.029,P＜0.05）；细胞生长速度明显降低；空白对照组、阴性对照组和转染组的细胞凋亡率分别为15.3％、16.1％和47.2％（P＜0.05）.结论 构建的twist特异性siRNA能够显著下调人乳腺癌MDA-MB-231细胞株twist基因表达,降低细胞体外增殖能力及肿瘤细胞浸润能力,提高细胞凋亡率.

摘要：目的观察靶向干扰twist基因对肝细胞性肝癌Smad3以及上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达的影响,探讨twist通过Smad3信号途径促进肝细胞癌中EMT的发生机制。方法收集山西医科大学第一医院普通外科2018年3月至2019年2月手术切除的肝细胞癌及癌旁组织各30例,免疫组织化学检测肝细胞癌及癌旁组织中twist、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3蛋白的表达,分析其表达的相关性。实验分为3组:空白对照组(Control)、随机小干扰RNA(siRNA)组(Mock)及实验组(siRNA-twist)。设计合成twist小干扰RNA(siRNA),脂质体2000法转染至HepG2细胞,蛋白质印迹法(Western blot)检测twist、TGF-β1、Smad3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达,Transwell实验观察细胞侵袭能力的变化。计数资料采用χ2检验,相关分析采用Spearman相关分析,多组计量资料的比较采用One-way ANOVA,两两比较采用LSD-t检验。结果twist、TGF-β1、Smad3在肝癌组织中的表达率依次为70.0%、63.3%及33.3%,在癌旁组织中的表达率依次为6.7%、26.7%及73.3%,与癌旁组织比较,twist及TGF-β1在肝细胞癌组织中表达增高,Smad3表达降低,差异均有统计学意义(twist:χ2=25.452,P<0.01;TGF-β1:χ2=8.148,P<0.01;Smad3:χ2=9.643,P<0.01)。twist在肝细胞癌中的表达与TGF-β1呈正相关(r=0.408,P<0.05),与Smad3呈负相关(r=-0.463,P<0.05)。靶向干扰twist基因可上调HepG2细胞Smad3、E-cadherin蛋白的表达(Smad3:F=25.625,P<0.01;E-cadherin:F=86.858,P<0.01),可下调TGF-β1、Vimentin蛋白的表达(TGF-β1:F=28.271,P<0.01;Vimentin:F=98.412,P<0.01),差异有统计学意义。靶向干扰twist基因可降低HepG2细胞增殖及侵袭能力。结论twist通过Smad3信号途径促进肝细胞癌中EMT的发生。

摘要：目的通过RNA干扰抑制twist基因在人宫颈癌HeLa细胞中的表达,观察twist基因沉默对HeLa细胞体外黏附、铺展及迁移能力的影响。方法根据shRNA设计原则,构建两种靶向twist基因的短发夹RNA(shRNA)干扰质粒,稳定转染HeLa细胞。通过荧光定量PCR及Western印迹法检测HeLa细胞中twist基因mRNA和蛋白的表达水平,利用黏附实验、铺展实验和划痕实验检测其对细胞黏附力和迁移力的影响。结果成功构建的twist shRNA真核表达载体稳定转染HeLa细胞后可显著降低twist基因的表达。与对照组相比,twist基因沉默组细胞的黏附、铺展及迁移能力明显下降(P<0.05)。结论成功构建的twist shRNA真核表达载体,能有效抑制HeLa细胞黏附、铺展及迁移能力。

摘要：目的探究miR-10b调节鼻咽癌促进鼻咽癌细胞转移的作用机制和其和twist的作用关系。方法采用脂质转染技术分别用miR10bmimics和mimics-NC及miR10binhibitor及twist siRNA转染或共转染CNE-2Z细胞,应用qRT—PCR检测miR-10b的表达水平。结果 (1)miR-10b mimic组中miR-1 10b的表达明显高于NC组(P0.05)。(2)制作划痕2h后便有细胞越过划痕生长,4h后miR-10b mimic组细胞移动至划痕内生长的细胞数超过inhibitor组和twistsiRNA组,至6h和8h再次计数,析因设计的方差分析结果显示,制造划痕2h-8h两组移动细胞数有显著差异(P<0.05)。结论我们揭示了twist诱导miR-1 10b表达,提高鼻咽癌细胞转移能力。

摘要：目的观察干扰twist基因表达对胰腺癌PANC1细胞糖酵解的影响,探讨其可能机制。方法设计并合成靶向twist的siRNA(siRNA-twist),采用脂质体法转染胰腺癌PANC1细胞,以非特异性siRNA(siRNA-NC)作为阴性对照,以未转染细胞作为空白对照。采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞twistmRNA和蛋白表达以及蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力;检测糖酵解限速酶(丙酮酸激酶、己糖激酶)活性及培养上清中乳酸含量。结果对照组、siRNA-NC组和siRNA-twist组twistmRNA表达量分别为1.00±0.09、1.01±0.08、0.36±0.02,蛋白表达量分别为0.41±0.05、0.42±0.04、0.12±0.06,siRNA-twist组mRNA和蛋白表达量均显著低于对照组和siRNA-NC组,差异有统计学意义(P值均<0.05);细胞存活率分别为(100.02±9.36)%、(100.01±10.25)%、(59.32±7.26)%,siRNA-twist组显著低于对照组和siRNA-NC组,差异有统计学意义(P值均<0.05);丙酮酸激酶活性分别为(0.73±0.05)、(0.72±0.08)、(0.43±0.05)U/mg,己糖激酶活性为(4.98±0.48)、(4.96±0.52)、(2.54±0.21)U/mg,乳酸含量分别为(20.36±2.61)、(20.64±3.05)、(9.48±1.09)mmol/L;p-Akt/Akt比值分别为0.65±0.04、0.63±0.07、0.25±0.04,siRNA-twist组均较对照组和siRNA-NC组显著降低,差异有统计学意义(P值均<0.05)。结论干扰twist基因表达能够抑制胰腺癌细胞增殖和糖酵解途径,其作用机制可能与Akt信号通路有关。

摘要：Q：modern-twist作为一个成长十余年的母婴、家居类品牌,有什么成长积淀可以与我们分享呢？A：作为一名女性同时也是一位母亲,我想创造一些可以保护人类与地球可持续发展的产品。如果选择直接用塑料制造产品,可以没有障碍地使用很多色彩和图案并以低价售卖。但考虑到石油化工产品对于健康和环境的影响,我们坚持选择使用最好的硅胶,并且不含任何填充剂以及廉价替代品。我们没办法控制家人接触到的一切事物,但是至少要保证孩子使用的围嘴围兜餐碗等产品是足够安全健康的。

摘要：在受测试的车中，该车的性价比属最合适，评价良好。对于要寻求一辆比较责些而漂亮的日常用交通工具的骑乘者来说，则twist Comfort会合乎要求。该车所用的零部件均系较长期被认可的牌号。车的设计细节优良，例如其起动的弱光，即使在更昂贵型号的车上也较少见。虽然该车的行程和助动并非完全令人兴奋，但测试队伍认为其总体性能和价格是很出众的．