摘要：目的设计一种基于外泌体高效递送的方式,将vegf和CD47双修饰的外泌体递送到热射病引起的肾损伤,减轻并修复肾损伤。方法构建靶向肾损伤的融合表达vegf和CD47的质粒,转染至大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)后分离提取外泌体。通过透射电子显微镜及纳米颗粒跟踪分析、蛋白质印迹法等方法对外泌体进行鉴定。经大鼠尾静脉分别注射200μg DiD标记的未修饰外泌体、vegf修饰的外泌体和vegf-CD47双修饰的外泌体,采用小动物活体成像仪检测并分析外泌体对肾脏的靶向作用。60只SD大鼠随机分6组每组10只,sham组为空白对照组(A组,n=10),其余各组均复制热射病肾损伤模型。模型复制成功后12、24、36 h,B组给予相同剂量生理盐水;C组给予质粒空载体(Empty plasmids,Ep)组、D组给予Exos组、E组给予Exos^(vegf)组、F组给予Exos^(vegf-CD47)组。于3次给药治疗后第72小时取肾脏组织和血:从组织水平观察肾组织病理变化并进行损伤评分;检测血清血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)评价治疗效果;WB和qRT-PCR分析炎症介质TNF-α、NF-κB的表达水平;检测增殖调控信号分子Ki67、FGF2、pAMPK、pERK和纤维化调控分子FGF23,综合分析对增殖和抑制纤维化的作用。结果成功获取了BMMSCs和Exos^(vegf-CD47)并进行鉴定,急性肾损伤模型动物均复制成功。Exos^(vegf-CD47)在活体肾组织中比ExosCtrl组和Exos^(vegf)组的荧光强度高(P<0.05)。治疗后72小时Exos^(vegf-CD47)组,肌酐、尿素氮下降(P<0.0001);Exos^(vegf-CD47)组Tubular casts score评分显著低于AKI+Exos组、AKI+Exos^(vegf)组(P<0.0001);促炎因子TNF-α、NF-κB蛋白水平明显下调(P<0.0001);而Ki67、FGF2显著上调(P<0.05),FGF23显著下调(P<0.0001)。结论vegf和CD47可以高效靶向热射病急性肾损伤,有效减轻损伤并促进修复,其机制可能与外泌体传递抑制肾组织炎症反应、促进增殖和抑制纤维化有关。

摘要：目的:以RNAi干涉的方法沉默vegf在肺癌细胞中的表达,为肺癌的RNAi基因治疗提供实验依据。方法:以vegf为靶点,利用siRNA设计原则,设计vegf-siRNA,构建pSilencerTM-3.1-vegf的干涉载体,稳定转染入肺癌细胞株A549中,检测vegf在细胞中的表达及稳定转染pSilen-cerTM-3.1-vegf肺癌细胞系A549对内皮细胞血管形成的影响,体内观察pSilencerTM-3.1-vegf肺癌细胞荷瘤小鼠的肿瘤生长情况。结果:pSilencerTM-3.1-vegf-2明显抑制了肺癌细胞系A549中vegf的表达,稳定转染pSilencerTM-3.1-vegf-2的肺癌细胞株A549体外生长没有发生变化,但是其对内皮细胞的血管生成有明显的抑制作用,体内荷瘤小鼠结果显示,与肺癌细胞株A549荷瘤小鼠比较,pSilencerTM-3.1-vegf-2-A549荷瘤小鼠中肿瘤的生长明显缓慢(P<0.05),生存期明显延长(P<0.05)。结论:我们成功构建了pSilen-cerTM-3.1-vegf的干涉载体,稳定转染pSilencerTM-3.1-vegf的肺癌细胞株A549中能够明显抑制vegf的表达,抑制内皮细胞小管形成,延长了荷瘤小鼠的生存期。

摘要：设计并构建一种含vegf和GRP抗原表位的表达载体p ET28a-vegfI-M2-GRP质粒,将其转化至大肠杆菌中,并对重组菌进行乳糖诱导表达,超声破碎,包涵体经洗涤、溶解、透析复性、离子交换层析等方法进行分离纯化后得到目的蛋白vegfⅡ/GRP,Western blot鉴定。建立前列腺癌RM-1细胞的C57BL/6J小鼠皮下移植瘤模型,以vegfⅡ/GRP作为疫苗进行免疫。观察荷瘤小鼠的肿瘤生长情况计算抑瘤率,比较各组血管生成数以及ELISA检测抗vegf抗体浓度,并研究该蛋白疫苗的抗肿瘤生长作用和抗血管生成作用。结果显示:ELISA结果表明小鼠血清中抗vegf抗体比NS组高(P<0.05),重组蛋白VG组与NS组相比抗血管作用显著(P<0.05)。初步显示构建的重组蛋白有抑制肿瘤血管生长的作用。

摘要：目的探讨以腺病毒载体局部应用血管内皮细胞生长因子基因对大鼠缺血随意型皮瓣成活的影响。方法30只SD大鼠随机分成3组,每组10只,于鼠背设计蒂在尾侧髂嵴水平的随意型皮瓣,面积为2cm×8cm,A组皮瓣远端23顺皮瓣长轴分10个点真皮下注入1012PFU的携带人血管内皮细胞生长因子基因的腺病毒(AdCMVvegf),B组同法注入同剂量的携带β半乳糖苷酶基因的腺病毒(AdCMVGal),C组注入1ml的生理盐水,3d后掀起皮瓣并原位缝合,术后7d观察实验结果。结果每组皮瓣成活面积的百分比分别为A组(8591±254)%,B组为(5956±118)%,C组为(6148±109)%,A组成活率显著高于B组和C组,差异有非常显著性意义(P005)。原位杂交、免疫组化显示,应用AdCMVvegf治疗的成活皮瓣中,vegf有表达,组织学切片显示,AdCMVvegf治疗皮瓣中肉芽组织增生,新生血管大量形成。结论以腺病毒为载体局部应用vegf基因能增加缺血皮瓣的成活面积,该法具有高效的特点。

摘要：目的 :设计了针对 vegf的第 外显子 (exon,E3)的反义、错义和正义寡核苷酸 ,观察 vegf反义寡核苷酸抑制 C6胶质瘤细胞 vegf表达的作用。 方法 :免疫细胞化学法观察反义、正义、错义寡核苷酸对 C6 胶质瘤细胞 vegf表达的影响 ;观察制备反义、正义、错义寡核苷酸的条件培养液对内皮细胞生长的抑制作用。 结果 :vegf反义寡核苷酸对 C6 胶质瘤细胞vegf的表达有明显抑制作用。 结论 :反义 vegf寡核苷酸通过抑制 C6 胶质瘤细胞 vegf的表达 ,进而抑制内皮细胞的生长。

摘要：目的　研究载体介导的RNAi(RNAinterference)技术对大肠癌细胞株HCT116中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor ,vegf)mRNA表达的抑制作用。方法　依据Tuschl等设计siRNA的原则,以vegf为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆到载体Pavu6+ 2 7中构建重组体(Pavu6+ 2 7 vegfsiR NA)。DOTAP脂质体法转染重组体至大肠癌HCT116细胞株,经G418筛选,以空质粒(Pavu6+ 2 7)转染为对照;半定量RT PCR法观察HCT116细胞中vegf mRNA表达改变。结果　①成功构建发卡样vegfsiRNA(smallinterfereRNA)真核表达载体(Pavu6+ 2 7 vegfsiRNA) ;②Pavu6+ 2 7 vegfsiRNA转染HCT116细胞后,vegf mRNA表达较空载体Pavu6+ 2 7转染的对照组显著下降。结论　成功构建载体介导的vegf靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制HCT116细胞中vegf mRNA表达,为下一步利用RNAi技术抑制肿瘤血管形成以及局部侵袭和远处转移提供研究基础。

摘要：目的制备血管内皮生长因子反义寡核苷酸(vegf-ASODN)的PLGA纳米粒,并探讨其制备工艺。方法采用复乳化溶剂挥发法制备,并用正交设计法对纳米粒的处方和制备工艺进行优化。结果纳米粒形态圆整,大小均匀,平均粒径150nm,包封率可达72%,含药量0.84%,体外释放缓慢,达到21天。结论vegf-ASODN的PLGA纳米粒制备工艺简便、重现性好。

摘要：生物机体内天然存在许多受体与配体,它们之间亲和结合力远远高于抗体亲和力(K_d=10^(-8)～10^(-9)).本实验根据vegfR和vegf之间的高亲和力(K_d=1.6×10^(-11)),以新生血管细胞表面的vegfR为靶点,设计vegf-hFc融合蛋白作为靶向抗肿瘤药物.在本实验中构建pcDNA3.1-IgG leader-vegf-hFc重组载体,转染CHO/dhFr^-细胞真核表达融合蛋白vegf-hFc,并通过Protein A纯化.使用A549细胞构建人非小细胞肺癌裸鼠肿瘤模型,小鼠静脉注射10μg vegf-hFc融合蛋白用以抗肿瘤研究.连续给药4次后,肿瘤生长曲线表明,与对照组相比,实验组小鼠的肿瘤生长得到明显的抑制甚至消退;数据统计显示,vegf-hFc肿瘤抑制率达90%.

摘要：目的探讨一种理想的99Tcm标记小分子多肽vegf125-136的方法,并研究标记物的生物学分布。方法在合成多肽的过程中直接完成多肽vegf125-136与双功能螯合剂MAG3的偶联,然后采用正交设计探讨99Tcm的最佳标记条件,并研究标记物稳定性和小鼠体内分布。结果①简化了偶联步骤,提高了偶联产率;②最佳标记条件下标记率约78%,经HPLC纯化后放化纯度>95%,且在室温条件下稳定性好;③99mTc-vegf125-136-MAG3在正常小鼠的血液中清除较快,在肾、肝中摄取较高。结论以MAG3为螯合剂用99Tcm标记vegf125-136有良好的标记率。

摘要：为了准确地分析血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,vegf)在犬乳腺肿瘤形成过程中的作用,试验设计了针对犬vegf基因的特异性引物,提取乳腺肿瘤组织RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了乳腺肿瘤vegf基因实时荧光定量PCR检测方法。运用实时荧光定量PCR检测了40例不同的犬乳腺肿瘤病例、2例正常乳腺组织。结果发现:在犬恶性乳腺肿瘤组织中,vegf基因表达量明显高于良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织(P0.05)。vegf基因在犬乳腺癌组织中的表达量远高于其在正常乳腺和良性乳腺肿瘤组织中的表达,且与淋巴结是否发生转移相关。因此,vegf可作为犬乳腺癌转移、复发的预测指标之一。