摘要：目的 :vegf c基因的真核表达载体 ,以便进一步研究vegf c基因在淋巴管生成中的作用。方法 :根据人vegf c的cDNA序列 ,设计合成一对 5’端分别含有EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点的特异性引物 ,运用RT RcR方法扩增人乳腺癌细胞MDA MB 2 31中的vegf ccDNA(1 2 6kb) ;回收PcR产物 (1 2 8kb) ,并将其连接至克隆载体pUMT 18中 ,重组的pUMT 18在大肠杆菌DH5α内扩增后 ,经质粒提取、EcoRⅠ和BamHⅠ酶切 ,筛选出阳性重组子 ,并进行基因测序鉴定 ;琼脂糖凝胶电泳回收含有vegf ccDNA全长的酶切片断 (1 2 7kb) ,然后在DNA连接酶作用下将其与真核表达载体pcDNA3 1(- )连接 ,重组质粒经EcoRⅠ和BamHⅠ酶切予以鉴定。结果 :RT PcR产物含有vegf ccDNA ,基因测序显示重组的pUMT 18中含有正确的人vegf ccDNA全长序列 ,重组的pcDNA3.1(- )中含有人vegf ccDNA全长序列。结论 :vegf c pcDNA3.1(- )。