摘要：目的　克隆、表达和鉴定猴细小病毒 (simianparvovirus,SPV)vp2蛋白。方法　用设计的SPVvp2区的特异性引物 ,PCR法扩增SPVvp2基因DNA片断 ;将获得的基因片断插入 pThioHisA载体中 ,转化大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,利用限制性内切酶酶切和核酸序列分析技术鉴定重组质粒 ;以LB培养液培养转化有插入SPVvp2基因的pThioHisA载体的大肠杆菌 ,以终浓度 1mmol·L -1的IPTG诱导蛋白的表达 ;用SDA PAGE和Westernblot分析和鉴定表达的蛋白。结果　经限制性内切酶酶切和核酸序列分析 ,获得了插入pThioHisA载体框架的SPVvp2基因的表达质粒 ;阳性转化大肠杆菌在IPTG诱导下获得了SPVvp2蛋白的表达 ;SDA PAGE和用抗 Thio及抗 SPVvp2的特异性抗体的Westernblot分析证实了表达蛋白的特异性。结论　获得了SPVvp2基因的表达质粒并在大肠杆菌中得了高效表达 ,为进一步建立SPV感染的检测方法和研究SPV的血清流行病学等奠定了基础。

摘要：根据Genbank上发表的猫泛白细胞减少症基因序列数据，设计了3对引物，并采用PCR方法对从东北虎粪便中分离出的FPV-HLJ的结构蛋白vp1、vp2和非结构蛋白NS1基因进行了扩增，将各片段克隆至pMD18-T载体，经PCR鉴定后进行了序列测定和分析。结果显示：FPV-HU与GenBank上公布的FPV、CPV和MEV毒株相比，核苷酸序列同源率vp1为98.8％-99.8％，vp2为98.1％-99.4％，NS1为98.6％-99.7％。vp1氨基酸同源率为97.6％-99.2％，vp2、NS1氨基酸同源率与其核苷酸同源率相同。并且vp1、vp2和NS1上分别有4、3和9处氨基酸发生变异。

摘要：为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——vp2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV vp 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PCR扩增,然后将扩增产物连接到酵母表面展示载体pYD1上构建了重组质粒pYD1-vp 2,将重组质粒转化至酵母EBY100感受态细胞中,得到含有重组质粒的酵母菌EBY100/pYD1-vp2,再向EBY100/pYD1-vp2中加入半乳糖进行vp2蛋白的诱导表达,并采用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光技术对vp2蛋白的酵母表面展示情况进行了分析。结果表明:经半乳糖诱导后vp2蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;细胞免疫荧光分析显示,重组酵母诱导表达后出现特异性绿色荧光,并且在一定时间内荧光强度与诱导时间成正相关,诱导24、36、48 h组及对照组(48 h)各组之间荧光酵母比例有显著性差异(P<0.05)。研究表明,IPNV vp2蛋白已经被酵母细胞高效表达并且成功展示于酵母细胞表面,本研究结果可为IPNV口服活载体疫苗的研制奠定基础。

摘要：为了构建犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)结构蛋白vp2稳定表达的HEK293T细胞系,以2017年新分离的CPV-WH株为材料,扩增其vp2基因,并进行进化树分析。根据安全插入位点AAVS1位点序列设计sgRNA,并构建Cas9及sgRNA的表达载体PX335-U6-sgRNA-Cas9,同时构建含有vp2的特异性同源序列的片段HM-puro-eGFP-vp2-HA,将两者共转染HEK293T细胞后,通过嘌呤霉素筛选稳定表达vp2的HEK293T细胞株,并通过测序确定vp2正确插入。进化树分析显示CPV-WH的vp2存在S557N、T570K 2个氨基酸突变,该氨基酸位点可能与病毒免疫逃逸有关。通过荧光观察和免疫印迹确定了稳定表达细胞系中vp2的表达。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了表达CPV结构蛋白vp2的HEK293T细胞,为后期制备CPV样颗粒提供细胞模型。

摘要：根据已报告的传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列，在病毒 Ｖ Ｐ２ 区域，设计 １ 对引物，并在 ２ 引物上分别加 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ酶切位点。对 ２ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 分离株 Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４，用异硫氰酸胍酚氯仿抽提一步法提取病毒 Ｒ Ｎ Ａ，然后进行逆转录和 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增，将扩增片段经酶切纯化后克隆于 ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中，以双脱氧链末端终止法测定 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列。将测定的分离株与标准对照株（ Ｓ１） Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ｖ Ｐ２ 基因片段的核苷酸序列进行计算机分析比较， Ｊ Ｓ３ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ ， Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ ， Ｊ Ｓ３ 与 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９９％ 。推导编码蛋白氨基酸序列， Ｊ Ｓ３ 和 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ ， Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９６％ ， Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９８％ 。这表明在我国流行的 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 毒株与标准毒株相比不仅在免疫学反应上有差异，而且在病毒核酸序列上有变异，这种变异是造成疫苗免疫失败或免疫逃避的分子基础。

摘要：用SPF鸡胚成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)J1C7毒株。用纯化的病毒颗粒提取RNA基因组。根据已报道的IBDV JD1株的vp2序列设计引物,利用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)进行扩增,将获得的1 359 bp片段克隆于pMD 18-T载体上。经过限制性酶切及PCR鉴定后,得到阳性重组质粒。对vp2基因进行全序列测定表明,克隆的vp2基因长1 359 bp,编码452个氨基酸。J1C7株vp2蛋白高变区内两个亲水区与其他标准Ⅰ型毒株完全相同,而且具有弱毒疫苗株的特征性氨基酸:222P、256V、279N、284T、294L、299N,七肽区的氨基酸序列为SWS ARGS,因此,从分子水平上推断本研究的J1C7株为标准Ⅰ型毒株,且属于弱毒疫苗株。与已报道的IBDV vp2基因的氨基酸序列进行比对,结果表明,本研究的J1C7株与来自欧洲和中国的弱毒疫苗株有密切的亲缘关系。

摘要：根据已发表的传染性法氏囊病病毒 ( IBDV) 5 2 /70株基因组序列 ,设计并合成了 1对特异扩增 IBDVvp2基因的引物。以 IBDV超强毒 ( vv IBDV) GZ株基因组为模板 ,利用 RT-PCR技术扩增出了 1 .5 kb的c DNA产物 ,将 vp2基因克隆于 p UC1 1 9质粒上 ,得到重组 p UC1 1 9质粒。对 vp2基因全序列进行了测定。序列分析和聚类分析表明 ,GZ株与欧洲超强毒株 UK6 6 1非常相似 ,而与经典强毒株。

摘要：为筛选出能有效抑制传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因复制的miRNA,采用RT-PCR方法从病毒基因组中进行结构蛋白vp2的基因扩增与序列测定,构建融合表达载体pvp2-EGFP。根据vp2测序结果,借助genscript软件设计针对vp2的5条miRNA,分别命名为mivp2A、mivp2B、mivp2C、mivp2D和mivp2E,将合成的5条miRNAs分别插入到pRFPRNAiC中形成mivp2s表达载体,这些载体分别与pvp2-EGFP共转染DF-1细胞系,通过NortheringBlotting方法检测mivp2s的表达,利用荧光共聚焦显微镜定性、流式细胞术定量的方法进行有效mivp2s的筛选。结果显示:mivp2s能成功表达;转染mivp2s表达载体组的绿色荧光蛋白(GFP)强度和数量都明显弱于或少于阴性对照组;mivp2s对vp2的抑制效率为59.7%到78.5%。表明所设计的miRNAs对vp2均有抑制作用,其中mivp2A和mivp2E效果最为显著。

摘要：利用原核表达系统表达水貂肠炎细小病毒(MEV)vp2衣壳蛋白,以制备抗vp2超免疫血清。根据vp2的基因序列,设计1对特异性引物,以MEV全基因组重组质粒p B-MEV-L为模板,利用PCR技术扩增出MEV vp2片段,并定向克隆到pET-32a载体中,经酶切与序列测定,证明成功构建了vp2基因原核表达质粒pET-MEV-vp2。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后实现了高效表达。免疫印迹试验表明,获得的重组蛋白具有较好的反应原性。以该蛋白为免疫原免疫新西兰兔,制备抗血清,四免后用ELISA方法检测其效价达到1∶1 024。免疫荧光试验证明,获得的抗体具有良好的结合活性。为MEV的病原生物学研究奠定基础。

摘要：为研究猪博卡病毒vp2蛋白的功能及其在疫病诊断中的作用,对其基因进行了克隆和原核表达。根据猪博卡病毒基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了1对引物,采用PCR方法扩增猪博卡病毒的vp2基因,并将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a-vp2,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为49 000的融合蛋白,蛋白质表达量较高,且以可溶性形式存在于菌体中。表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好。Western blot结果显示,表达的vp2蛋白能与His抗体发生特异性免疫反应。说明该试验成功克隆了猪博卡病毒的vp2基因并进行了原核表达,为研究该蛋白的功能及建立血清学诊断方法奠定了基础。