摘要：wnt途径是重要的细胞信号转导途径,该途径参与了从胚胎到成体的一系列控制胚胎早期的发育、决定细胞分化、细胞增殖及生长的调控,异常表达或激活该途径会导致各种疾病甚至肿瘤发生。本文重点阐述了wnt信号通路在胚胎发育、细胞分化及其在肿瘤发生过程中的作用,同时揭示深入研究wnt信号通路,设计出阻断wnt通路的物质,可为将来肿瘤的治疗开辟一条新的途径。

摘要：目的观察芳香烃受体(AHR)基因沉默后对P19细胞向心肌分化进程中wnt信号通路的影响。方法根据小鼠AHR基因序列设计并构建AHR基因的shRNA真核表达载体,将AHR干扰质粒转染至P19细胞,通过G418筛选出稳定的AHR基因沉默表达的阳性细胞株,应用实时荧光定量RT-PCR技术检测P19细胞分化过程中wnt信号通路中关键基因GSK3β、β-catenin mRNA的表达水平。结果构建的AHR-shRNA表达质粒能显著抑制AHR基因的表达;随着P19细胞向心肌细胞分化,实验组β-catenin基因的相对表达量低于对照组,而GSK3β基因的相对表达量则高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论干扰AHR基因表达对心脏发育过程中wnt信号通路产生调节作用。

摘要：肠道干细胞(intestinal stem cells,ISCs)是位于胃肠道的一类具有持续增殖分化能力的细胞;wnt信号通路是最早发现于果蝇体内的与胚胎发育和癌症发生相关的蛋白质作用网络,对维持肠内稳态具有多层次的调节作用。作者概述了肠道干细胞的研究进展和wnt信号通路的主要作用,了解了肠道干细胞参与病理性炎性的过程,进而揭示了发育不良和慢性炎症导致癌症的分子机理。

摘要：目的探讨围生期脑缺血再灌注损伤后,不同发育期胎鼠胚脑wnt信号通路关键分子糖原合成酶激酶(GSK)-3β及β-连环蛋白(catenin)mRNA表达水平变化。方法采用完全随机设计,将40只成功受孕的雌性SD大鼠分为实验组及对照组,每组各20只。两组分别于孕14,16,18及20d(分别计为E14,16,18及20)时,各取5只孕鼠予相关处理:实验组钳夹双侧子宫动脉30min,建立围生期脑缺血再灌注模型,并于再灌注24h后留取胎鼠胚脑标本;对照组则不钳夹子宫动脉,仅在与实验组对应时间点留取胎鼠胚脑标本。采用实时定量(RT)-PCR检测胎鼠胚脑wnt信号通路关键分子GSK-3β和β-catenin mRNA表达水平;采用尼氏染色和TUNEL标记法,检测两组胎鼠胚脑神经细胞凋亡情况。统计学比较两组胎鼠在相同发育期及同组胎鼠在不同发育期胚脑GSK-3β及β-catenin mRNA相对表达量,以及胚脑神经细胞凋亡率差异。结果 1两组胎鼠在相同发育期(E14,16,18或20)胚脑GSK-3β及β-catenin mRNA相对表达量比较,以及同组胎鼠胚脑GSK-3β或β-catenin mRNA相对表达量在不同发育期(E14,16,18及20)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2实验组胎鼠胚脑神经细胞凋亡率,在相同发育期均较对照组高,且差异有统计学意义[(0.254±0.001)vs(0.027±0.004),t=46.547;(0.256±0.022)vs(0.029±0.003),t=45.917;(0.263±0.011)vs(0.029±0.002),t=34.355;(0.265±0.031)vs(0.030±0.003),t=91.108;均为P0.05)。3胎鼠胚脑尼氏染色结果显示,实验组神经细胞的细胞质嗜碱性增强,细胞核固缩浓染。结论 wnt信号通路和发育期宫内缺血缺氧性脑损伤的关系尚待进一步研究。

摘要：目的:构建基于CRISPR/cas9系统调控wnt信号通路的载体,并在细胞水平验证其调控基因表达的效率。方法:选取wnt信号中负性调控分子,设计并合成能够表达靶向上述分子gRNA的互补DNA克隆序列,BsmBI限制性内切酶酶切载体后,采用分子克隆的方法将上述序列克隆至目的载体lenti-sgRNA-Ms2-zeo,测序正确的克隆通过Lipofectamine2000与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共同转染入293细胞;转染24h后收集细胞,qRt-PCR检测目的基因的表达。结果:筛选了wnt信号通路中已知的19个负性调控基因;针对每个基因设计了两对gRNA序列,并构建了能够表达gRNA和MS2融合序列的载体,测序结果显示重组质粒的DNA序列与预期完全相符。随机挑选了4个表达载体与lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine共转进入细胞,qPCR结果显示构建的目的载体联合lenti-Ms2-P65-HSF1-Hygro和lenti-dcas9-VP64-blastine载体可以协同促进靶分子表达。结论:本研究成功构建了基于CRISPR/cas9基因编辑系统调控wnt信号的载体。

摘要：目的:探讨RNA干扰人成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)基因表达对骨肉瘤细胞凋亡及wnt信号通路的影响。方法:以Lipofectamine^(TM) 2000为载体,参照其转染说明将设计合成的2个针对FGFR3的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染人骨肉瘤MG63细胞,同时设置空白对照组,转染48 h,Western blotting检测FGFR3、β-catenin、Survivin和Bax蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFHDA)探针检测活性氧(ROS)含量。结果:2个FGFR3 siRNA转染MG63细胞后FGFR3蛋白表达均明显受到抑制,与空白对照组及NC组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。MG63细胞转染FGFR3 siRNA后细胞凋亡率明显升高,ROS含量明显升高,β-catenin和Survivin蛋白的表达明显降低,Bax蛋白的表达明显升高,与NC组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:RNA干扰FGFR3基因表达可诱导骨肉瘤细胞凋亡,机制可能与细胞内ROS含量升高及wnt信号通路下调有关。

摘要：目的探讨组蛋白脱乙酰酶9(HDAC9)基因沉默对非小细胞肺癌细胞生物学特性和wnt信号通路影响。方法取非小细胞肺癌细胞株A549,设计HDAC9沉默序列,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测HDAC9、JNK、β-catenin、wnt-5的mRNA及蛋白表达水平。采用CCK8法、划痕实验、Transwell实验和流式细胞术检测细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡等。结果si-HDAC9转染细胞后JNK、β-catenin、wnt-5表达下降,细胞生长抑制,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显降低,凋亡增加;si-HDAC9+rwnt3a转染可逆转上述趋势(F=9.070~159.400,P均<0.05)。结论HDAC9沉默表达可抑制wnt信号通路,抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭并促进细胞凋亡。

摘要：背景:长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)-DANCR可调节包括骨代谢的多个生物学过程。课题组基因芯片结果显示糖尿病骨质疏松小鼠脂肪组织中LncRNA-DANCR显著高表达。目的:探究LncRNA-DANCR通过wnt/β-catenin信号通路对糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞成骨能力的影响。方法:分离培养糖尿病骨质疏松小鼠和正常对照小鼠脂肪干细胞,成骨诱导3 d后,采用qRT-PCR、Western blot检测LncRNA-DANCR、wnt信号分子β-catenin以及成骨转录因子(RUNX2、OPN)的表达。设计LncRNA-DANCR特异性siRNA转染糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞,成骨诱导3 d后,采用qRT-PCR、Western blot和碱性磷酸酶染色检测wnt信号分子β-catenin、成骨转录因子(RUNX2、OPN)的表达以及成骨能力改变。结果与结论:①成骨诱导3 d后,糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞的LncRNA-DANCR表达水平显著高于正常对照小鼠脂肪干细胞,wnt信号分子β-catenin和成骨转录因子RUNX2、OPN的表达显著低于正常对照小鼠脂肪干细胞;②siRNA转染糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞成骨诱导3 d后,β-catenin以及RUNX2、OPN显著高表达,成骨能力增强;③结果表明,LncRNA-DANCR通过抑制wnt/β-catenin信号通路降低糖尿病骨质疏松小鼠脂肪干细胞的成骨能力,沉默LncRNA-DANCR可恢复其成骨能力。

摘要：Dvl(Dishevelled)是wnt信号通路传递的核心分子,无论内源的还是过表达的Dvl在细胞体内都能因自聚而形成puncta.研究已报道,Dvl主要通过其DIX结构域上的三个作用区域来介导自聚:SiteⅠ、SiteⅡ和SiteⅢ,其中SiteⅠ和SiteⅡ还参与了Dvl-DIX与Ccd1-DIX的异聚.为了进一步得到Dvl2-DIX上SiteⅠ和SiteⅡ的直接三维结构,本研究设计了一系列的SiteⅢ突变体.通过体内和体外实验进一步证实了这些突变氨基酸确实参与了Dvl2-DIX的自聚,然后对这些SiteⅢ突变体蛋白成功地进行了纯化和结晶,最终得到3.1魡的Dvl2-DIX(G65A)晶体数据.分析表明该晶体存在片层位移现象,需对数据进行一定修正后才能进行后续的结构分析.体外实验又证实了这些突变氨基酸不影响Dvl2-DIX与Ccd1-DIX的异聚,为了进一步研究Dvl2-DIX与Ccd1-DIX相互作用,我们对这些SiteⅢ突变体蛋白与Ccd1-DIX进行共结晶.最终获得Dvl2-DIX(G65A)与Ccd1-DIX复合物的初晶,利于进一步的晶体优化及数据收集.

摘要：wnts 包括出现了是包括 organogenesis，中脑发展以及干细胞增长调整几 aspectsof 开发的发信号的串联的部分的蛋白质的一个大家庭。在在成年大脑的 neuronal 电路并且也的发展的 wnt 发信号小径 playsdifferent 角色，在它调整 synaptic transmissionand 的地方粘性。它也包括癌症和 neurodegenerative 疾病在各种各样的疾病被含有，在基本生物过程的 reflectingits 关联。这评论与 Alzheimer 的疾病(广告) 的一个焦点在成熟 nervoussystem 关于 wnts 功能总结进步。我们讨论正规的 modulating 和不在经典中的 wnt signalingas 的前景为 neuroprotection 的策略。这将包括 wnts 的潜力到：是的(i) 行为在学习和记忆的 hippocampalsynapses 和影响的有势力管理者；(ii ) 调整成年神经发生；并且(iii ) 最后控制广告致病。