摘要：本研究旨在对驴zfy基因的cDNA序列进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中公布的家牛zfy基因mRNA序列(登录号:NM_177491.1)设计特异性引物,运用RT-PCR技术获取驴zfy基因的cDNA序列,并对zfy基因CDS区核苷酸序列与蛋白质结构进行生物信息学分析。结果表明,驴zfy基因CDS区序列长度为2 325bp,编码774个氨基酸;蛋白质二级结构预测结果显示,zfy蛋白没有信号肽及跨膜结构;驴zfy基因CDS区序列与家牛、绵羊、人、家猫、家犬、马鹿、黑猩猩、藏羚羊的同源性分别为92.9%、92.6%、91.8%、93.8%、92.5%、92.3%、91.6%和92.6%;对驴和其他8种哺乳动物zfy基因CDS区核苷酸序列构建的系统进化树显示,驴与绵羊、藏羚羊、家牛、马鹿亲缘关系较近,与家犬和家猫的亲缘关系稍远,与人和黑猩猩亲缘关系最远。本研究成功克隆出驴zfy基因CDS区序列,为进一步研究驴zfy基因的功能奠定了基础。

摘要：目的探讨干扰驴Z fy基因的体内外干扰效果。方法根据驴zfy基因设计合成4段shRNA,并由独立的U6启动子启动,每两个shRNA片段串联组合成干扰载体,体外培养生精细胞检测干扰载体的干扰效率,筛选最佳的干扰载体用于体内验证干扰效果。结果结果显示:构建出2个驴zfy基因双shRNA串联重组干扰载体CV250-1、CV250-2,细胞水平验证结果表明CV250-1的干扰效率为76.37%±6.36%,差异极显著(P<0.01);CV250-2的干扰效率为67.73%±4.94%,差异显著(P<0.05)。成功对CV250-1重组载体进行体内验证,经母体静脉血胎儿游离DNA性别鉴定得到胎儿雌性率为71.05%(P<0.05)。结论成功构建的驴zfy基因重组载体CV250-1,可抑制种公驴睾丸组织zfy基因的表达,细胞水平干扰效率为76.37%,体内试验胎儿雌性率为71.05%,差异显著(P<0.05)。

摘要：为了探究zfy基因在性别控制中的作用,试验运用RNAi技术,设计并合成了2对靶向猪zfy基因的shRNA序列,构建了重组质粒(shRNA-a,shRNA-b),将其转染到体外培养的猪生精细胞中,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测生精细胞中zfy基因mRNA的表达,然后选取4头健康公猪进行体内干扰试验,分为A组和B组,每组2头,将重组质粒注射到猪睾丸中,A组注射shRNA-a,B组注射shRNA-b,对照组为试验猪场不进行注射的公猪,观察子一代性别比例。结果显示,qRT-PCR检测shRNA-a和shRNA-b对生精细胞中zfy基因的抑制效率分别为33%(P0.05)。本试验成功构建干扰猪zfy基因的重组质粒,并应用于动物试验,证实zfy基因可以影响后代的性别比例,在动物性别控制中发挥一定的作用,但导致体内干扰试验结果与预期结果相反的原因仍需进一步验证。

摘要：目的　建立一种较简便、敏感的对性连锁遗传病胎儿进行产前性别鉴定方法并探讨高温循环全自动测序中几个因素对测序鉴定zfy基因结果的影响。方法　自行设计zfy引物并建立了巢式聚合酶链反应扩增男性特异性zfy基因方法 ,计算机辅助设计的两对寡核苷酸引物位于Y染色体短臂的Ucdo4 3保守区内 ;同时对DNA纯度、浓度和测序过程中水的质量对DNA自动测序结果的影响进行回顾性分析。结果　结果表明在DNA纯度、浓度较低以及配制测序胶时所用纯水水质较差时 ,对测序曲线造成不同程度的影响 ,从而影响测序结果。结论　提示该方法检测胎儿DNA是可行的 ,同时在DNA自动测序鉴定产物特异性时需使用高纯度高浓度的DNA和高质量的纯水 ,要想获得较长的测序片段 ,所用模板浓度不能太低。

摘要：为了研究绵羊zfy基因干扰载体对性控效果的影响,本试验利用RNA干扰技术针对绵羊zfy基因m RNA序列设计、构建3个sh RNA干扰载体(p LL3.7-A、p LL3.7-B和p LL3.7-C),并对体外培养的生精细胞进行转染,利用q RT-PCR测定zfy基因m RNA表达丰度,从而筛选出有效的干扰载体。然后将效果较好的干扰载体通过绵羊睾丸注射,进行体内干扰试验。q RT-PCR检测结果显示:成功构建了3个干扰载体,其中p LL3.7-A、p LL3.7-B对生精细胞zfy基因的表达水平分别下降了54%(P0.05);p LL3.7-A、p LL3.7-B干扰载体的体内干扰试验结果显示,后代雌羔率分别为64.7%(P0.05)。本研究结果表明,本实验构建的干扰载体对绵羊zfy基因产生干扰作用,且使后代性别比例发生一定程度的偏移,为进一步研究绵羊性别控制提供了理论依据。

摘要：目的：建立一种对性连锁遗传病胎儿进行产前性别诊断的方法及探讨利用孕妇外周血中胎儿细胞检测ＺＦＹ基因的可行性。方法：用计算机辅助设计的两对寡核苷酸引物位于染色体ＺＦＹ基因保守区内，并建立了巢式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）技术扩增男性特异性的ＺＦＹ基因。结果：扩增产物分别为３５４ｂｐ和３０７ｂｐ，对不同标本的扩增结果表明，该引物具有高度的敏感性和特异性，２０份男性标本中均发现特异扩增片段，但在２０份女性标本中均未发现。应用该引物对３１份孕妇外周血连续监测，胎儿ＺＦＹ基因检出率随孕周增加而增高，总准确率达９６８％（３０／３１），４５份绒毛标本的阴性／阳性之比为１：１１４３，接近实际的胎儿性别比。结论：用巢式ＰＣＲ技术检测ＺＦＹ基因具有特异、敏感、快速、准确的优点，提示该法检测胎儿细胞ＤＮＡ是可行的，在临床上可用于性连锁遗传病的产前性别诊断。

摘要：为了研究zfy基因在生精过程中的作用,采用RNA干涉的方法抑制zfy基因的表达,设计并构建zfy基因的siRNA重组表达载体(pSilencer5.1/zfy225及pSilencer5.1/zfy2122)。选取32只雄鼠随机分成4组,其中2组分别注射本研究构建的2个重组表达载体作为试验组,另2组分别注射相同体积空载体和生理盐水作为对照组,采用睾丸局部注射的方式导入雄鼠体内,间隔10d注射1次,共4次,最后1次注射17d后,采集睾丸组织,利用荧光实时定量PCR法检测zfy基因mRNA的表达水平。结果表明,pSilencer5.1/zfy2122干扰后zfy基因的mR-NA表达水平显著降低,与对照组比较差异极显著(P<0.01);pSilencer5.1/zfy225差异显著(P<0.05)。其结果可为研究zfy基因在小鼠生精过程中的功能奠定基础。

摘要：本文主要对产前诊断方法以及使用孕妇外周血中胎儿细胞检测zfy基因的可行性进行分析,计算机设计好的寡核苷酸引物在染色体zfy基因保守区内,然后使用聚合酶链反应(PCR)技术对男性特异性zfy基因扩增。下面对建立过程与产前诊断具体分析。

摘要：奶牛的早期胚胎性别鉴定是奶牛胚胎分割及移植技术产生较大经济效益的前提，用ＰＣＲ技术进行早期胚胎性别鉴定具有准确、快速、灵敏度高的特点。利用人和鼠的性别分化相关的ＤＮＡ序列ＺＦＹ、ＺＦＸ基因序列设计的引物对公牛和母牛的染色体ＤＮＡ、ＰＣＲ扩增，将扩增产物定向克隆到ｐＵＣ１１８上，获得ＺＦＹ、ＺＦＸ转化子，并测定了ＺＦＹ、ＺＦＸ基因的序列，发现两者同源性达８８．２％，以此为基础可设计引物和探针，以ＰＣＲ方法进行高灵敏度的奶牛性别鉴定。

摘要：目的 :在已建立的较简便、敏感的对性连锁遗传病胎儿进行产前性别鉴定方法的基础上探讨高温循环全自动测序中几个因素对测序鉴定zfy基因结果的影响。方法 :自行设计zfy引物并建立了富集胎儿细胞结合巢式聚合酶链反应扩增男性特异性zfy基因并进一步循环测序方法 ,计算机辅助设计的两对寡核苷酸引物位于Y染色体短臂的Ucdo 4 3保守区内 ;同时对DNA纯度、浓度和测序过程中水的质量对DNA自动测序结果的影响进行回顾性分析。结果 :实验表明利用孕妇外周血中微量胎儿细胞扩增男性特异性zfy基因并进行高温循环全自动测序方法可行 ,结果可靠 ,在DNA纯度、浓度较低以及配制测序胶时所用纯水水质较差时 ,对测序曲线造成不同程度的影响 ,从而影响测序结果。结论 :提示该方法检测胎儿DNA是可行的 ,同时在DNA自动测序鉴定产物特异性时需使用高纯度高浓度的DNA和高质量的纯水 ,要想获得较长的测序片段 ,所用模板浓度不能太低。