摘要：利用aroa基因设计了 1对引物 ,分别对 10株标准副鸡嗜血杆菌 (HPG)菌株、14株分离的HPG菌株进行PCR扩增 ,结果均得到了与预期大小一致的片段 ,而对 10株非HPG菌株和 3株病毒进行扩增则无相应片段产生 ;该PCR能检测出 10个菌细胞。与常规PCR方法相比 ,aroa

摘要：旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroa基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroa基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroa基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系;将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5α和JM109细胞中,PCR鉴定筛选到的阳性菌株,并回收其扩增条带进行克隆、测序。CRISPR/Cas 9载体的酶切与测序结果均正确,表明载体构建成功;PCR鉴定结果显示,该系统对三种大肠杆菌均能进行aroa基因的有效敲除,敲除效率为46%~58%;测序结果进一步证实目的基因敲除成功。本试验成功构建大肠杆菌aroa基因CRISPR/Cas 9敲除系统,为进一步研究致病菌aroa基因功能及开发减毒大肠杆菌疫苗提供新型、有效的基因敲除工具。

摘要：为了构建副猪嗜血杆菌aroa基因插入突变自杀载体，试验采用自杀质粒介导的同源重组方法首先构建了自杀质粒pSD，根据副猪嗜血杆菌aroa基因设计PCR特异性引物，上游引物5’末端~13BamHI位点，下游引物5’末端加SalI位点，