摘要：目的优化b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖活化工艺,提高Hib结合疫苗的产量和质量。方法设计三因素三水平正交试验,考察不同pH、溴化氰加量和活化时间对Hib多糖衍生物、多糖蛋白结合物的影响,依据正交试验结果确定最优的多糖活化工艺,并对该工艺进行放大和验证。结果多糖活化时pH和活化时间对多糖衍生物衍生率及重均分子量(M_(w))均影响显著(P均0.05)。多糖衍生物衍生率和M与多糖蛋白结合物的多糖回收率、多糖与蛋白比值、高分子结合物含量、K_(D)≤0.2的多糖回收率、GMT各指标均显著相关(P均<0.05)。综合多糖蛋白结合物产量、免疫原性及稳定性。确定的最优多糖活化工艺为:在pH 10.5条件下,加入与精制多糖等重的溴化氰反应5 min。结论经优化的多糖活化工艺可以用于Hib多糖蛋白结合物规模化的生产。

摘要：通过单因素试验和box-behnken实验设计考察在蛋白去除过程中b型流感嗜血杆菌荚膜多糖浓度、Tween 80及(NH_4)_2SO_4含量对多糖回收率及蛋白残留含量的影响,建立回归模型.预测荚膜多糖质量浓度8.54mg/mL、Tween 80质量分数12.9%、(NH_4)_2SO_4质量分数28.12%为该方法的最佳参数组合,并通过实验进行验证其符合度分别达到93.9%和90.3%,符合度较高.研究通过实验设计(design of experiments,DOE)试验建立并优化了Hib荚膜多糖中杂蛋白的新方法,能够应用于实际的生产工艺中.

摘要：探明b型流感嗜血杆菌荚膜多糖发酵的最适培养基及接种量,为降低其疫苗荚膜多糖制备成本提供理论依据,设计6种培养基进行摇瓶培养,检测发酵上清液中的菌体量,筛选最适培养基,并在此基础上优化接种浓度及氯化血红素、辅酶I添加量进行发酵罐培养,测定荚膜多糖含量,评估培养效果。结果表明:接种后OD600值为0.1的接种量较为适宜b型流感嗜血杆菌生长;3号改良培养基(选择性大豆蛋胨、酵母浸粉、酸水解酪蛋白、K2HPO4、氯化钠、葡萄糖、氯化血红素、辅酶I分别为1%、1%、0.50%、0.25%、0.50%、0.70%、25mg/L和20mg/L)对b型流感嗜血杆菌液体进行发酵罐发酵可获得大量菌体且稳定,荚膜多糖含量为(105.6±13.2)mg/L。

摘要：目的:建立可同时检测痰标本中肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,Sp)与b型流感嗜血杆菌(Hae-mophilus influenzae type b,Hib)的多重降落PCR。方法:以Sp cpsA基因、Hib capⅡ区为靶标设计引物,并用Primer-bLAST在线软件检测其特异性,多重降落PCR检测492份痰标本,并以标准菌株作为对照,结果与细菌培养法进行比较。结果:所建立的多重降落PCR对Sp、Hib的检测下限分别达6.3 pg、0.2 pg;与细菌培养法相比,灵敏度及总灵敏度均达100%,检测Sp、Hib特异性分别为94%、98%,总特异性达92%。结论:所建立的多重降落PCR具有高灵敏度与特异性,可作为Sp、Hib感染的快速诊断与流行病学研究的备选手段。

摘要：目的利用荧光定量PCR技术,建立b型流感嗜血杆菌的快速敏感特异的检测方法。方法以b型流感嗜血杆菌荚膜基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以b型流感嗜血杆菌菌株,提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和退火温度。以b型流感嗜血杆菌和8种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性。结果本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为800 nM、200 nM,退火温度为56℃时,具有良好的特异性和敏感性。在8株相关菌株的检测中,除b型流感嗜血杆菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。在纯菌条件下,定量检测低限100 cfu/mL。稳定性分析表明:同一样品重复检测4次C t值的最大变异系数为5.46%。与常规方法比较,符合率达100%。结论该方法特异性强,稳定性高,操作简便快速,具有较大的推广及应用价值。